背景[1-6]
Cytochrome C Rabbit Monoclonal Antibody(细胞色素c兔单克隆抗体)是用Cytochrome C对兔进行系统免疫然后筛选出兔Cytochrome C致敏B细胞后与骨髓肿瘤细胞杂交最后制得既能产生单一Cytochrome C抗体,又能无限增殖的Cytochrome C抗体杂种细胞系。Cytochrome C(细胞色素c)属于细胞色素c蛋白家族。与其他细胞色素不同,细胞色素c是高度水溶性的,并且是携带一个电子的电子传递链的必要组分。它能够经历氧化和还原,但不结合氧。它在Complexes III(辅酶Q-Cyt C还原酶)和IV(Cyt C氧化酶)。
在人类中,细胞色素c由CYCS基因编码。细胞色素c属于c型细胞色素家族的I类并且含有结合血红素的特征性CXXCH(半胱氨酸-任何-任何-半胱氨酸-组氨酸)氨基酸基序。该基序位于肽链的N-末端,它含有组氨酸作为血红素铁的第五配体。第六配体由朝向C-末端发现的甲硫氨酸残基提供。将蛋白质主链折叠成五个α-螺旋,其从N末端到C末端编号为α1-α5。当提及线粒体细胞色素c时,分别将螺旋α3,α4和α5称为50s,60s和70s螺旋。
细胞色素c是一种高度保守的蛋白质,遍布植物,动物和许多单细胞生物中。这一点,以及它的小尺寸(分子量约12,000道尔顿),使其在分支学研究中很有用。细胞色素c分子已被研究用于进化生物学的一瞥。细胞色素c具有由约100个氨基酸的链组成的一级结构。许多高阶生物具有104个氨基酸的链。人类细胞色素c的序列与黑猩猩(我们最亲近的亲属)的序列相同,但与马的不同。细胞色素c具有在真核生物中高度保守的氨基酸序列,仅有少数残基。在一项研究中测试的30多个物种中,104个氨基酸中有34个是保守的;在他们的特征位置相同。例如,人细胞色素氧化酶与细胞色素小麦反应Ç,体外;这适用于所有测试物种。
此外,+0.25伏的氧化还原电位在研究的所有细胞色素c分子中是相同的。细胞色素c是线粒体中电子传递链的组分。细胞色素c的血红素组接受来自bc 1复合物的电子并将电子转移到复合物IV。细胞色素c也参与细胞凋亡的起始。在细胞色素c释放到细胞质后,蛋白质结合凋亡蛋白酶激活因子-1(Apaf-1)。细胞色素c还可以催化几种氧化还原反应,如羟基化和芳香氧化,并通过氧化各种电子供体如2,2-连氮基-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)显示过氧化物酶活性,2-酮-4-硫代甲基丁酸和4-氨基安替比林。细菌细胞色素c起亚硝酸还原酶的作用。
应用[7][8]
细胞色素c兔单克隆抗体可用于细胞凋亡的信号通路的研究:
细胞色素c在细胞凋亡中也具有中间作用,细胞凋亡是用于在发育过程中杀死细胞或响应感染或DNA损伤的受控形式的细胞死亡。细胞色素c与线粒体内膜中的心磷脂结合,从而锚定其存在并防止其从线粒体释放并引发细胞凋亡。虽然心磷脂和细胞色素c之间的初始吸引力是由于细胞色素c上的极端正电荷而静电,但最终的相互作用是疏水的,其中来自心磷脂的疏水尾部将其自身插入细胞色素c的疏水部分。
在细胞凋亡的早期阶段,刺激线粒体ROS产生,并且心磷脂被心磷脂-细胞色素c复合物的过氧化物酶功能氧化。然后将血红素蛋白从线粒体内膜分离,并可通过外膜中的孔挤出到可溶性细胞质中。钙水平的持续升高先于细胞质c从线粒体释放。少量细胞色素c的释放导致与内质网(ER)上的IP3受体(IP3R)的相互作用,导致ER钙释放。
钙的总体增加引发细胞c的大量释放,然后细胞c作用于正反馈回路以维持通过IP3R释放ER钙。这解释了ER钙释放如何达到细胞毒性水平。这种细胞色素c的释放反过来激活胱天蛋白酶9,半胱氨酸蛋白酶。然后Caspase 9可以继续激活caspase 3和caspase 7,负责从内部破坏细胞。
参考文献
[1] Tafani M,Karpinich NO,Hurster KA,Pastorino JG,Schneider T,Russo MA,Farber JL(March 2002)."Cytochrome c release upon Fas receptor activation depends on translocation of full-length bid and the induction of the mitochondrial permeability transition".The Journal of Biological Chemistry.277(12):10073–82.
[2] Ambler RP(May 1991)."Sequence variability in bacterial cytochromes c".Biochimica et Biophysica Acta.1058(1):42–7.
[3] Mavridou DA,Ferguson SJ,Stevens JM(March 2013)."Cytochrome c assembly".IUBMB Life.65(3):209–16.
[4] Liu J,Chakraborty S,Hosseinzadeh P,Yu Y,Tian S,Petrik I,Bhagi A,Lu Y(2014-04-23)."Metalloproteins Containing Cytochrome,Iron–Sulfur,or Copper Redox Centers".Chemical Reviews.114(8):4366–4469.
[5] Schneider J,Kroneck PM(2014)."Chapter 9:The Production of Ammonia by Multiheme Cytochromes c".In Kroneck PM,Torres ME.The Metal-Driven Biogeochemistry of Gaseous Compounds in the Environment.Metal Ions in Life Sciences.14.Springer.pp.211–236.
[6] Liu X,Kim CN,Yang J,Jemmerson R,Wang X(July 1996)."Induction of apoptotic program in cell-free extracts:requirement for dATP and cytochrome c".Cell.86(1):147–57.
[7] Orrenius S,Zhivotovsky B(September 2005)."Cardiolipin oxidation sets cytochrome c free".Nature Chemical Biology.1(4):188–9.
[8] Boehning D,Patterson RL,Sedaghat L,Glebova NO,Kurosaki T,Snyder SH(December 2003)."Cytochrome c binds to inositol(1,4,5)trisphosphate receptors,amplifying calcium-dependent apoptosis".Nature Cell Biology.5(12):1051–61.