背景[1-3]
CAL 27人舌鳞癌细胞是一种人舌鳞癌细胞系，被广泛用于口腔癌和舌癌的研究。这种细胞系可以用于体外实验，以更好地理解舌鳞癌的发生和发展机制，探索新的治疗策略，以及评估药物的疗效和毒性。
与其他细胞系相比，CAL 27人舌鳞癌细胞具有一些独特的生物学特性，例如高侵袭性和转移能力，以及对某些药物的敏感性和耐药性。这些特性使得CAL 27成为研究口腔癌和舌癌的理想细胞系。
CAL 27人舌鳞癌细胞的建系时间较早，建立于20世纪80年代初。该细胞系来源于一位56岁白人男性的病变舌中间部分，具有高密度颗粒状胞浆和上皮细胞样的形态，贴壁生长。
使用CAL 27人舌鳞癌细胞进行体外实验时，需要使用适当的培养基和培养条件进行培养，例如DMEM加10%FBS。同时，为了保持细胞的稳定性和生物学特性，需要注意避免污染和交叉污染，并及时进行传代和冻存。
CAL 27人舌鳞癌细胞系是一种重要的细胞系，在口腔癌和舌癌的研究中发挥着重要作用。通过使用这种细胞系，可以更好地了解疾病的发病机制和发展过程，探索新的治疗策略，以及评估药物的疗效和毒性。
CAL 27人舌鳞癌细胞
CAL 27人舌鳞癌细胞培养操作
1)复苏CAL 27人舌鳞癌细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)CAL 27人舌鳞癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)CAL 27人舌鳞癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4][5]
CAL 27人舌鳞癌细胞可以用于PDGF-BB和乳酸介导舌鳞癌细胞与癌相关成纤维细胞糖代谢共生及机制研究
研究以PDGF-BB和乳酸为切入点,探索PDGF-BB和乳酸介导舌鳞癌细胞与癌相关成纤维细胞糖代谢偶联共生作用及分子机制,为探索通过干预PDGF-BB和/或乳酸作用逆转肿瘤发生发展奠定基础。
[方法]1.常规培养CAL 27人舌鳞癌细胞、口腔黏膜正常成纤维细胞hOMF;酶消化组织块法和差速贴壁分离纯化舌鳞癌成纤维细胞和癌旁成纤维细胞。
2.miRNA-26a-5p靶基因预测,双荧光素酶基因报告验证。构建过表达miRNA-26a-5p慢病毒载体转染成纤维细胞,以空载质粒为对照。q-PCR检测miRNA-26a-5p与靶基因表达情况。
3.采用含20ng/ml PDGF-BB无血清培养基培养正常成纤维细胞3天,应用q-PCR、蛋白免疫印记、免疫荧光检测成纤维细胞活化、糖代谢和线粒体自噬相关指标。葡萄糖摄取实验和乳酸分析试剂盒分别检测葡萄糖摄取和乳酸分泌能力。JC-1和MDC分析线粒体膜电位和自噬情况;免疫荧光和透射电镜观察细胞内自噬体,Mitophagy试剂盒检测线粒体自噬。应用原代培养成纤维细胞和过表达miRNA-26a-5p成纤维细胞行进一步验证。
4.建立PDGF-BB活化成纤维细胞与舌鳞癌CAL 27人舌鳞癌细胞间接共培养模型,CCK8检测CAL 27人舌鳞癌细胞增殖情况;q-PCR和ELSIA检测PDGF-BB表达和分泌情况;蛋白免疫印记检测bax、bcl-2、MCT-1、LDH-B和NF-κB/p-NF-κB,以及免疫荧光染色进一步分析MCT-1、LDH-B和NF-κB表达情况。
5.PDGF-BB活化成纤维细胞上清可促进CAL 27人舌鳞癌细胞增殖,加入单羧酸转运蛋白(转运乳酸)抑制剂CHC后,降低了其促增殖作用。乳酸也可促进CAL 27人舌鳞癌细胞的增殖,并下调bax表达,上调bcl-2、NF-κB、p-NF-κB、MCT-1和LDH-B蛋白表达;上调CAL 27人舌鳞癌细胞对PDGF-BB的表达和分泌,加入CHC和NF-κB通路抑制剂SC75741后,上述作用被明显下调,差异具有统计学意义(p<0.05)。
6.PDGF-BB活化成纤维细胞与CAL 27人舌鳞癌细胞共移植裸鼠皮下,与CAL 27人舌鳞癌细胞组相比,Cal-27+hOMF和Cal-27+CAFs组形成的混合移植瘤体积和重量明显增加,并且Cal-27+CAFs组更加显著,各组之间差异具有统计学意义(p<0.05)。瘤体免疫组化染色显示α-SMA、MCT-4、LDH-A主要表达于肿瘤间质,p-NF-KB则主要表达于肿瘤细胞,MCT-1则在间质细胞和肿瘤细胞均表达明显。多重免疫荧光染色显示肿瘤间质中α-SMA与MCT-4和LDH-A以及与LC3A/B均存在明显共定位,并且LC3A/B荧光强度在Cal-27+hOMF和Cal-27+CAFs组明显增强,具有统计学意义(p<0.05)。
参考文献
[1]Comprehensive Analysis of Monocarboxylate Transporter 4(MCT4)expression in breast cancer prognosis and immune infiltration via integrated bioinformatics analysis.[J].Yuan Chen;Zhang Jie;Lou Jianjuan;Wang Siqi;Jiang Yanni;Wu Feiyun;Wang Shouju.Bioengineered,2021
[2]Active autophagy in cancer-associated fibroblasts:Recent advances in understanding the novel mechanism of tumor progression and therapeutic response[J].Bikash Chandra Jena;Lipsa Rout;Ankita Dey;Mahitosh Mandal.Journal of Cellular Physiology,2021(11)
[3]Energy metabolism disorder mediated ammonia gas-induced autophagy via AMPK/mTOR/ULK1-Beclin1 pathway in chicken livers[J].Li Zhuo;Miao Zhiying;Ding Linlin;Teng Xiaohua;Bao Jun.Ecotoxicology and Environmental Safety,2021
[4]Autophagy in stromal fibroblasts promotes tumor desmoplasia and mammary tumorigenesis.[J].Rudnick Jenny A;Monkkonen Teresa;Mar Florie A;Barnes James M;Starobinets Hanna;Goldsmith Juliet;Roy Srirupa;Bustamante Eguiguren Sofía;Weaver Valerie M;Debnath Jayanta.Genes&development,2021
[5]任晓斌.PDGF-BB和乳酸介导舌鳞癌细胞与癌相关成纤维细胞糖代谢共生及机制研究[D].昆明医科大学,2023.