背景[1-3]
NCI-H2066人肺癌贴壁细胞系是一种常用的细胞模型，用于研究肺癌的生物学特性和药物筛选等。以下是对NCI-H2066人肺癌贴壁细胞系的简介：
细胞来源：NCI-H2066人肺癌贴壁细胞系来源于一位61岁男性的肺癌组织。
细胞形态：NCI-H2066人肺癌贴壁细胞系呈上皮细胞样形态，贴壁生长。
功能与特点：NCI-H2066人肺癌贴壁细胞系具有肺癌细胞的典型生物学特征，包括特定的基因表达和信号转导通路等。该细胞系可用于研究肺癌的发生、发展、转移以及药物筛选等。
培养条件：NCI-H2066人肺癌贴壁细胞系需要在特定的培养条件下进行培养，包括适宜的气相、温度、培养基和传代方法等。
应用领域：NCI-H2066人肺癌贴壁细胞系被广泛应用于肺癌的研究，包括肺癌的机制探讨、靶点发现、药物筛选和药效评价等。同时，它也是生物信息学和系统生物学中常用的数据集之一。
NCI-H2066人肺癌贴壁细胞系在肺癌研究中具有重要的应用价值，因为它可以模拟人类肺癌的生长和转移过程，为研究肺癌的发生机制、诊断和治疗提供了重要的实验模型。此外，NCI-H2066细胞系还可以用于筛选抗肿瘤药物、评估药物疗效和毒副作用等研究。
NCI-H2066人肺癌贴壁细胞系
NCI-H2066人肺癌贴壁细胞系培养操作
1)复苏NCI-H2066人肺癌贴壁细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)NCI-H2066人肺癌贴壁细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)NCI-H2066人肺癌贴壁细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4][5]
NCI-H2066人肺癌贴壁细胞系可以用于软坚散结方调控miR-182-5p表达影响EMT抗肺癌复发转移作用机制研究
从基于miR-182-5p表达水平对EMT靶基因的mRNA转录后调控角度探讨软坚散结方防治肺癌术后复发转移作用的分子机制;进一步阐释软坚散结方通过调控miR-182-5p表达影响EMT从而以防止肺癌复发转移的作用机制。
方法(1)软坚散结方(RJSJ)抑制肺癌术后复发转移的体内研究。建立裸小鼠人非小细胞肺癌NCI-H460及NCI-H2066人肺癌贴壁细胞系皮下移植瘤术后转移模型,经软坚散结方干预后,采用Log-Rank生存分析法以及寿命表法,分析对术后无病生存时间的影响。采用q-RT-PCR检测let-7a、miR-21、miR-34、miR-200c、miR-182-5p、miR-18a、miR-106b、miR-155、miR-7641,此9个microRNA分子在肺转移瘤中表达量。
(2) miR-182-5p对肺腺癌患者术后复发转移的预后影响及靶基因的预测分析。利用美国国家癌症研究所(NCI)建立的TCGA(癌症基因组数据集)数据库,采用ROC曲线、生存分析方法,明确其表达的变化与肺腺癌临床预后的关系;通过GO分析以及miRNA-mRNA互作网络预测,预测其作用的生物学环节及靶基因。(3)miR-182-5p调控肺癌细胞侵袭转移的作用研究。运用荧光定量PCR技术检测不同转移潜能NSCLC细胞株(A549、H460、95-D、NCI-H2066人肺癌贴壁细胞系、H1975等)、HBE(肺支气管上皮细胞)之间miR-182-5p表达差异。将miR-182-5p mimics转染至肺癌细胞株,检测转染后的肺癌细胞株迁移、侵袭能力变化。
(4)软坚散结方抗肺癌侵袭转移的作用研究。采用CCK8法检测软坚散结方对NCI-H2066人肺癌贴壁细胞系、H1975、H460肺癌细胞的增殖的影响、流式细胞术检测细胞周期的影响、Transwell和划痕愈伤实验检测对细胞侵袭、迁移行为的影响。q-RT-PCR检测软坚散结方对转移EMT过程中转录因子Twist、Snail,EMT上游产物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和下游产物MMP-2、MMP-9的mRNA的表达的影响。
参考文献
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[5]焦丽静.软坚散结方调控miR-182-5p表达影响EMT抗肺癌复发转移作用机制研究[D].上海中医药大学,2023.