背景[1-3]
LIM1215人结直肠癌细胞系是一种来源于人结直肠癌的细胞系,常用于研究结直肠癌的生物学特性、药物筛选和治疗策略。该细胞系具有以下特点:
来源:LIM1215人结直肠癌细胞系来源于人结直肠癌组织,经过多次传代和筛选,形成了一个相对稳定的细胞系。
形态特征:LIM1215人结直肠癌细胞系呈多边形或长条形,大小约为15-30微米,胞质丰富,核大而圆,核仁明显。
生长特性:LIM1215人结直肠癌细胞系生长迅速,传代周期约为24-48小时,可在含有10%胎牛血清的DMEM培养基中稳定生长。
侵袭转移特性:LIM1215人结直肠癌细胞系具有较强的侵袭和转移能力,可通过Transwell小室实验等方法检测其侵袭和转移能力。
其他特性:LIM1215人结直肠癌细胞系还具有一定的增殖能力,可用作研究结直肠癌细胞增殖相关疾病的模型。
LIM1215人结直肠癌细胞系
LIM1215人结直肠癌细胞系培养操作
1)复苏LIM1215人结直肠癌细胞系:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10 cm皿中,加入约8 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)LIM1215人结直肠癌细胞系传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,弃去消化液,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基,轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心4 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
3)LIM1215人结直肠癌细胞系冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例;
a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4][5]
LIM1215人结直肠癌细胞系可以用于Lin28B-Let-7调控环路影响结肠癌化疗敏感性的实验研究
明确Lin28B-Let-7在结肠癌中的调控关系,并阐明其对结肠癌细胞化疗敏感性的影响,从而有助于对逆转结肠癌耐药性关键靶点的研究。目的:1、在8种人结肠癌细胞系(结肠癌细胞系HCT116、SW620、SW1116、SW480、LOVO、LIM1215人结直肠癌细胞系、LS174T和DLD1)中检测Lin28B的表达,并在人结肠癌组织中的检测其表达情况,进而对其定位表达进行观察;2、在过表达Lin28B的结肠癌细胞中证实Lin28B-Let-7调控环路的存在;3、过表达Lin28B/Let-7,观察其对化疗药物5-FU敏感性的变化。
材料与方法:1、对8种人结肠癌细胞系进行PCR检测,观察Lin28B表达情况;Real-time PCR,Western Blot及免疫组化技术对解放军总医院海南分院21例结肠癌和19例正常结肠组织进行检测,观察Lin28B表达情况;2、在人结肠癌细胞系中分别采用免疫荧光法、核浆蛋白分离后行Western Blot和表达GFP慢病毒载体感染的方法检测Lin28B的表达定位。在人结肠癌组织中进行免疫组化染色以进一步确认定位观察;3、在人结肠癌细胞系中,分别过表达Lin28B后观察Let-7的表达情况;反之,过表达Let-7观察Lin28B是否受到抑制;最后,检测过表达Let-7或Lin28B对化疗药物5-FU敏感性的影响。
结果:在结肠癌细胞系HCT116、SW620、SW1116、SW480、LOVO、LIM1215人结直肠癌细胞系、LS174T和DLD1以及结肠癌组织中均发现Lin28B有着广泛的表达,且在结肠癌组织中的表达明显高于正常的结肠组织。继而,Lin28B的定位表达的实验结果观察到其在LIM1215人结直肠癌细胞系细胞核和细胞浆中均有表达,且在细胞浆中呈现高表达。随后,通过Real-time PCR和Western Blot的结果验证了Lin28B-Let-7调控环路的存在。最后,药敏试验结果显示过表达Let-7的结肠癌细胞对5-FU化疗药物的敏感性增加,而过表达Lin28B的结肠癌细胞对5-FU化疗药物的敏感性降低。
参考文献
[1]Induction of the RNA Regulator LIN28A Is Required for the Growth and Pathogenesis of RESTless Breast Tumors[J].Kearney T.W.Gunsalus;;Matthew P.Wagoner;;Kassondra Meyer;;Wyatt B.Potter;;Barry Schoenike;;Soyoung Kim;;Caroline M.Alexander;;Andreas Friedl;;Avtar Roopra.Cancer Research,2012(13)
[2]Lin28A and Lin28B Inhibit let-7 MicroRNA Biogenesis by Distinct Mechanisms[J].Elena Piskounova;;Christos Polytarchou;;James E.Thornton;;Robert J.LaPierre;;Charalabos Pothoulakis;;John P.Hagan;;Dimitrios Iliopoulos;;Richard I.Gregory.Cell,2011(5)
[3]Molecular Basis for Interaction of let-7 MicroRNAs with Lin28[J].Yunsun Nam;;Casandra Chen;;Richard I.Gregory;;James J.Chou;;Piotr Sliz.Cell,2011(5)
[4]Immunotherapy targeting colon cancer stem cells[J].Flora Iovino;;Serena Meraviglia;;Marisa Spina;;Valentina Orlando;;Vitanna Saladino;;Francesco Dieli;;Giorgio Stassi;;Matilde Todaro.Immunotherapy,2011(1)
[5]宁宁.Lin28B-Let-7调控环路影响结肠癌化疗敏感性的实验研究[D].中国人民解放军医学院,2015.