Benzonase核酸酶的应用

2020/2/11 8:32:33

背景及概述[1]

核酸酶是一类催化核苷酸和核酸中的磷酸二酯键水解的酶,分内切核酸酶(endonucleases)和外切核酸酶(ex-onucleases),对紫外线引起的DNA大型光损伤和各种化学物与DNA形成的加合物的切除修复中起作用。在N-糖基化酶切除异常的碱基形成AP位点(见切除修复)后,如插入酶将正确的碱基插入AP位点仍不能达到完全修复时,即由AP内切核酸酶在AP位点或其旁边的5′端将DNA切开一个缺口,使一端成为5′-磷酸基,另一端成为3′-OH基。随之外切核酸酶再切除一些碱基。除AP内切核酸酶外,还有一些对某些DNA损伤有特异性的内切核酸酶。其中较特殊的是切除由紫外线产生的嘧啶二聚体的UV内切核酸酶。它有时还能作用于许多较大的螺旋扭曲变形损伤。由于UV内切核酸酶还具有外切作用,有时称之为“切除核酸酶”(ex-cinuclease)。参见切除修复、聚合和连接酶。

Benzonase核酸酶,是一种核酸内切酶,可将核酸降解成2~5个碱基的5‘单磷酸核苷酸,因其能高效降解任何形式(双链,单链,线状,环状)的DNA和RNA而没有蛋白裂解活性,又被称为“全能核酸酶”。Benzonase核酸酶能有效降低蛋白样品粘度,去除蛋白样品中核酸的污染,且无蛋白酶活性残留和内毒素污染,核酸酶活性达1×106U/mg蛋白。Benzonase核酸酶在降低粘性的同时,也具有多种其他用途,如:减少了样品处理时间,增加了蛋白产量,离心时时沉淀和上清分离的更彻底,更便于溶液的离心(尤其是超滤);提高色谱纯化的效率等。

应用[1]

1)蛋白提取时去除核酸污染:在重组蛋白纯化或组织细胞样品蛋白提取时,Benzonase核酸酶可有效降低样品粘度,利于下游操作

2)与细胞或细菌裂解液配合使用,去除粗提物中的核酸,降低溶液粘性,提高蛋白质产量

3)减少存放的外周血单细胞(PBMC)的结块现象

4)降解核酸,利于不可溶性蛋白复性前高质量包涵体制备

5)有效去除带负电荷的核酸对双向SDS-PAGE蛋白样品的影响,改善蛋白质的分离效果,增强2-DE分辨率

6)疫苗和病毒样品制备中DNA污染的去除

主要参考资料

[1] 卫生学大辞典

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