介绍
罗米地辛,英文名为Romidepsin,其化学名称为(1S,4S,7Z,10S,16E,21R)‑7一乙叉基一4,21‑二异丙基‑2‑氧杂‑12,13一二硫‑5,8,20,23‑四氮杂双环[8,7,6]二十三碳‑16‑烯‑3,6,9,19,22‑五酮,分子式为C24H36N4O6S2,是一种双环四肽,具有稳定的疏水结构,其结构中特有的二硫键是发挥活性的关键基团。2009年,罗米地辛获得美国食品药品管理局(FDA)批准,用于治疗皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)。
图一 罗米地辛
应用
罗米地辛为组蛋白去乙酰化酶(HDACs)抑制剂,透过肿瘤细胞膜进入细胞质,在细胞内二硫键被谷胱甘肽还原成巯基,与锌依赖的HDACs中的锌相结合而发挥抑制HDACs的作用,从而进一步诱导肿瘤细胞分化和凋亡。
合成
罗米地辛的合成一共分为六步,分别为:
合成步骤一:称取替代度为0.5mmol/g的CTC Resin 2g(合成规模1mmol),加入到固相反应柱中,用DMF洗涤2次,用DMF溶胀树脂30分钟后,称取1.01g Fmoc‑Val‑OH,0.38g HOBt、0.03gDMAP用DMF溶解,冰水浴下加入0.6mL DIPEA活化后,加入上述装有树脂的反应柱中,反应2小时反应结束,用DMF洗涤6次,得到中间体I。
合成步骤二:固相反应柱中中间体I用20%DBLK脱除Fmoc保护基团,然后用DMF洗涤6次,取少量树脂进行茚三酮试验,树脂显色。称取1.02g Fmoc‑Thr‑OH、0.38g HOBt、0.03gDMAP溶于体积比为1:1的DMF和NMP混合溶液,冰水浴下加入0.3mL DIC活化后,加入到固相反应柱,室温反应2h(反应终点以茚三酮法检测为准,如果树脂无色透明,则反应完全,树脂显色,表示反应不完全,需再偶联反应1h)。重复上述脱除Fmoc保护和加入相应氨基酸偶联的步骤,依次完成Fmoc‑D‑Cys(Trt)‑OH、Fmoc‑D‑Val‑OH和(R)‑3‑叔丁氧基‑7‑巯基‑4‑庚烯酸得到中间体V。
合成步骤三:称取0.03gDMAP、0.20g对甲苯磺酰氯用10mL二氯甲烷溶解后,加入0.60ml哌啶。然后将混合液加入到含有中间体V的固相反应柱中,反应2小时,反应结束后用DMF洗涤6次,再用甲醇收缩3次,真空干燥得到3.0g中间体VI。
合成步骤四:将步骤3中得到的3.0g中间体VI树脂加入到50ml烧瓶中,配置裂解试剂(体积比,TFA:EDT:PhOH:H2O=95:5:3:2),将裂解试剂30mL倒入烧瓶中,室温反应2小时。反应结束,过滤树脂,收集滤液。滴加至300ml乙醚试剂中,离心、无水乙醚洗涤、真空干燥,得到0.70g中间体VII,纯度80.52%。
合成步骤五:将步骤4得到的0.70g中间体VII溶于5mL70%的乙腈水溶液,加入六水合氯化铁0.20g,35℃反应5小时。反应结束后加入饱和氯化铵溶液10mL,然后用二氯甲烷萃取三次,依次用饱和食盐水洗、水洗,无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩,得0.60g中间体VIII,纯度75.5%。
合成步骤六:在1000mL的反应瓶中,依次加入3.8g三苯基膦、0.6g对甲苯磺酸、2.2mL偶氮二甲酸二异丙酯和500mL四氢呋喃。混合液室温搅拌30分钟,然后冷却至0℃,滴加溶有实施例五制得的0.60g中间体VIII的四氢呋喃溶液100mL,两小时滴完。0℃反应三小时后,浓缩得油状物。此油状物用水稀释10倍采用RP‑HPLC系统,波长230nm,色谱柱为50×250mm反相C18柱,0.2%醋酸水溶液/乙腈溶液流动相纯化,收集目的峰馏分,旋转蒸发浓缩,冻干得到罗米地辛0.25g,HPLC纯度98.5%,总收率40.5%。
图二 罗米地辛的合成
参考文献
[1]陈学明,林欣媛,宓鹏程,等. 一种罗米地辛的合成方法[P]. 广东省:CN201811555690.1,2022-03-08.