背景[1-3]
DDX5抗体是一种重组兔单克隆抗体，用于研究DDX5。这种抗体在Western Blot、免疫沉淀（Immunoprecipitation）、免疫荧光（Immunofluorescence）和eCLIP实验中有效。它对人类、小鼠、大鼠和猕猴样本敏感，分子量为68 kDa。
DDX5抗体是一种与RNA解旋酶Ddx5相关的抗体。在医学研究中，DDX5抗体可能用于检测某些特定类型的细胞或组织中的DDX5蛋白表达水平，从而帮助研究者了解DDX5在生物学过程中的作用，尤其是在细胞分化、凋亡以及肿瘤发生发展中的角色。
DDX5抗体
DX5抗体的使用步骤可能会根据实验类型和抗体的具体性质有所不同。以下是一些常见的使用步骤，以Western Blot和免疫沉淀（Immunoprecipitation）为例：
Western Blot步骤：
1.样品准备：
提取细胞或组织中的蛋白质。
使用适当的蛋白质定量方法（如Bradford或BCA法）进行蛋白质定量。
将蛋白质样品进行变性（通常通过加热）并加入载样缓冲液。
2.电泳：
将蛋白质样品加载到SDS-PAGE凝胶中。
在恒定电流下进行电泳，直到蛋白质根据分子量分离。
3.转膜：
将凝胶中的蛋白质转移到适当的膜上，如PVDF或硝酸纤维素膜。
使用转移缓冲液，通常在恒定电流下进行。
4.封闭：
将膜在封闭缓冲液（如含5%脱脂奶粉的TBST）中孵育，以减少非特异性结合。
5.抗体孵育：
用TBST稀释DDX5抗体（例如1:1000稀释比例）。
将膜与稀释后的抗体在室温下孵育1-2小时，或在4°C下过夜。
6.洗涤：
使用TBST洗涤膜，每次5-10分钟，重复3-5次，以去除未结合的抗体。
7.检测：
使用相应的二抗（如辣根过氧化物酶标记的抗兔IgG）进行孵育。
再次洗涤膜。
使用化学发光检测试剂盒检测信号，并通过X光片或成像系统记录结果。
应用[4][5]
DDX5抗体可以用于蛋白激酶A的潜在底物DDX5在人子宫基质细胞蜕膜化中的功能研究
妊娠的关键事件主要包括精卵结合、胚胎植入、子宫内膜基质细胞蜕膜化、胎盘发育等。其中蜕膜化的子宫内膜基质细胞可以在胎盘成功建立之前为成功植入的胚胎提供足够的营养物质。此外,蜕膜化的基质细胞还能够保护胚胎免受母体免疫细胞的攻击,从而实现胚胎的免疫豁免。人子宫内膜基质细胞(HESCs)在发生蜕膜化前具有一个增殖的过程,而后HESCs在体内雌孕激素的作用下分化成为蜕膜细胞。研究显示,cAMP-PKA信号通路具有起始蜕膜化的作用,但在蜕膜化的起始阶段,PKA激活后通过磷酸化哪些底物蛋白发挥作用以及具体的调控机制尚未清楚。
为了探索cAMP-PKA在诱导HESCs蜕膜化起始阶段中的具体分子机制,我们利用HESCs体外诱导蜕膜化模型进行了相关的研究。在给予蜕膜化刺激(cAMP和P4)24小时后,利用基序特异抗体富集潜在的PKA底物,通过质谱鉴定出了富集组分中的多种蛋白,本研究选取RNA解螺旋酶DDX5作为主要研究对象。利用siRNA在基质细胞中敲降DDX5后,通过MTS检测发现HESCs增殖速度显著低于对照组;运用DDX5抗体免疫荧光检测发现,敲降DDX5/17后,Ki67信号阳性的细胞比率明显下降。
实验说明敲降DDX5/17后抑制HESCs的增殖。敲降DDX5/17后,q-PCR和DDX5抗体WB的结果显示,在cAMP和P4诱导分化过程中标志分子PRL和IGFBP1的诱导水平明显降低,敲降组与对照组相比没有发生明显的蜕膜化诱导的上皮样形态学改变,说明DDX5参与调控子宫内膜蜕膜化过程。初步的机制研究发现,敲降DDX5后蜕膜化起始阶段FOXO1的表达异常,说明DDX5可能通过调控FOXO1的表达参与了蜕膜化的发生。综上所述,本研究揭示了RNA解螺旋酶DDX5在蜕膜化进程中的作用。
参考文献
[1]Cardiac function modulation depends on the A-kinase anchoring protein complex.[J].Zhu Yan-Rong;;Jiang Xiao-Xin;;Zheng Yaguo;;Xiong Jing;;Wei Dongping;;Zhang Dai-Min.Journal of cellular and molecular medicine,2019
[2]MiR-203 regulates proliferation and apoptosis of ovarian cancer cells by targeting SOCS3.[J].Liu H-P;;Zhang Y;;Liu Z-T;;Qi H;;Zheng X-M;;Qi L-H;;Wang J-Y.European review for medical and pharmacological sciences,2019
[3]Dysfunction of B-cell lymphoma 2/adenovirus E1B 19KD interacting protein 3 in decidua is involved in the pathogenesis of preeclampsia.[J].Ma Jin;;Yang Jieqiong;;Lv Shijian;;Gao Minzhi;;Sun Yun;;Chen Zi-Jiang;;Zhang Cong.Journal of hypertension,2019
[4]Functions of DEAD box RNA helicases DDX5 and DDX17 in chromatin organization and transcriptional regulation.[J].Giraud Guillaume;;Terrone Sophie;;Bourgeois Cyril F.BMB reports,2018
[5]王乐蒙.蛋白激酶A的潜在底物DDX5在人子宫基质细胞蜕膜化中的功能研究[D].厦门大学,2020.