背景[1-3]
HKR1抗体是一种针对HKR1蛋白的特异性抗体，HKR1是GLI-Kruppel家族的人类基因之一。HKR1，也称为Krueppel相关锌指蛋白1或锌指蛋白875，是一种核蛋白，可能参与转录调控。HKR1属于Krueppel C2H2型锌指蛋白家族，含有13个C2H2型锌指和1个KRAB域。HKR1基因位于人类染色体19q13.12上。以下是对HKR1抗体的详细介绍：
HKR1抗体
一、基本信息
产品名称：HKR1抗体
别名：根据不同供应商可能有所不同，但通常与HKR1蛋白相关
规格：不同供应商提供的规格可能有所不同，如0.1ml/0.2ml、100ul等
纯度：通常为高纯度，如100%
状态：一般为冻干粉或液体形式
浓度：如1mg/ml
二、特性
特性：HKR1抗体通常具有较高的特异性和稳定性，能够用于多种实验技术中，如Western Blot、免疫组化（IHC）、流式细胞术（FCM）等。
使用范围：
研究领域：HKR1抗体广泛应用于肿瘤、心血管、细胞生物、免疫学、发育生物学、染色质和核信号等多个领域。
实验技术：可用于检测HKR1蛋白的表达水平、定位及与其他分子的相互作用等。
三、使用注意事项
储存条件：HKR1抗体应储存在-20°C或更低温度，避免反复冻融。
溶解方式：对于冻干粉形式的抗体，通常需添加适量的蒸馏水或缓冲液进行溶解。
工作浓度：最佳工作浓度需由实验者通过实验确定。
不同供应商提供的HKR1抗体具有不同的特异性和应用范围。例如，Proteintech提供的HKR1多克隆抗体适用于WB和ELISA，对人类样本有反应，推荐的稀释比例如下：WB 1:200-1:1000。Affinity Biosciences提供的HKR1多克隆抗体（产品编号DF3084）适用于WB(1:500-1:1000)、IF/ICC(1:100-1:500)和IHC(1:50-1:200)，对人类和小鼠样本有反应。赛默飞世尔科学公司提供的HKR1单克隆抗体适用于WB(1-5µg/mL)和ELISA(10µg/mL)，对人类样本有反应。
在使用HKR1抗体时，应根据实验需求和所选抗体的说明书来调整稀释比例和实验步骤。不同抗体可能会有不同的最佳使用条件，因此在实验前仔细阅读抗体的使用说明非常重要。
应用[4][5]
HKR1抗体可以用于基于分子改造和发酵优化提高透明质酸酶的表达
研究选用的表达宿主为P.pastoris GS115,为进一步提高HAase的产量,通过信号肽的筛选,HAase编码基因LHyal的N端融合双亲短肽(Amphipathic peptides,APs),以及在3 L发酵罐上研究诱导温度对HAase表达的影响,使HAase高效表达,以期早日实现水蛭HAase的产业化。
本论文研究的主要结论如下:(1)使用信号肽ns B提高HAase的分泌表达将质粒p PIC9K-LHyal的信号肽α-factor分别替换成信号肽HKR1,YTP1,SCS3和ns B,并HKR1抗体及相关抗体进行鉴定后获得含不同信号肽的重组菌株。摇瓶发酵培养,重组菌株GS115-ns B-LHyal的胞外酶活最高且为7.96×104 U·m L-1,比重组菌株GS115-LHyal(信号肽为α-factor)发酵酶活提高了26.0%,说明信号肽ns B更适合HAase的分泌表达。在3 L发酵罐中进行补料分批发酵,产量为1.03×106 U·m L-1,是摇瓶产量的12.9倍。(2)LHyal基因的N端融合短肽AP2促进HAase的分泌表达在信号肽ns B的基础上,LHyal基因的N端融合6种不同的APs,获得不同短肽重组菌株。重组菌株GS115-ns B-AP2-LHyal胞外酶活最高且为9.67×104 U·m L-1(摇瓶水平),比重组菌株GS115-ns B-LHyal发酵酶活提高了21.7%。经SDS-PAGE蛋白电泳分析,融合短肽AP2菌株发酵上清液中目的蛋白含量比重组菌株GS115-ns B-LHyal发酵产目的蛋白含量高,说明短肽AP2能促进HAase的分泌表达。(3)融合蛋白AP2-HAase的酶学性质分析为进一步研究融合短肽AP2对HAase的影响,分析其酶学性质及酶动力学参数的变化。融合蛋白AP2-HAase经镍柱纯化后,最适反应温度由45°C提高为50°C,且热稳定性有小幅度的提高,最适反应p H值由6.5降为5.5,在p H值3.0-8.0保持稳定,比酶活为1.44×106 U·mg-1,酶动力学常数Km值降低,kcat/Km值增大,这表明融合短肽AP2能够提高HAase的催化效率。
参考文献
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[3]Integrating Terminal Truncation and Oligopeptide Fusion for a Novel Protein Engineering Strategy To Improve Specific Activity and Catalytic Efficiency:Alkalineα-Amylase as a Case Study[J].Haiquan Yang;;Long Liu;;Hyun-dong Shin;;Rachel R.Chen;;Jianghua Li;;Guocheng Du;;Jian Chen.Applied and Environmental Microbiology,2013(20)
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[5]张娜.基于分子改造和发酵优化提高透明质酸酶的表达[D].江南大学,2015.