背景[1-3]
小鼠肿瘤坏死因子β(TNFβ)ELISA试剂盒是一种用于测定小鼠血清、血浆、组织等样本中TNF-β含量的实验试剂盒。该试剂盒使用双抗体夹心法测定样本中TNF-β的水平。
小鼠肿瘤坏死因子β(TNFβ)ELISA试剂盒
一、基本信息
产品名称:小鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒
英文名称:TNF-βELISA Kit
用途:用于体外定量检测小鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)的含量
保存条件:2-8℃,有效期一般为6个月
规格:常见规格有96T和48T
二、产品组成
小鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒通常包含以下主要组件:
标准品
标准品稀释液
酶标包被板
链霉亲和素/HRP(辣根过氧化物酶标记的检测抗体)
20倍浓缩洗涤液
显色剂A液和B液
终止液
其他必要的辅助试剂和耗材
三、实验原理
该试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)原理。往预先包被小鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
四、实验步骤
实验步骤大致如下(具体步骤可能因试剂盒品牌和生产商而异):
准备试剂和样本:将试剂盒和样本平衡至室温,准备所需的试剂和耗材。
加样:设置标准品孔、样本孔和空白孔,加入相应的标准品、样本和稀释液。
温育:将酶标板置于37℃恒温箱中温育一定时间(如60分钟)。
洗涤:弃去孔内液体,用洗涤液洗涤酶标板数次,以去除未结合的杂质。
加检测抗体:向每孔加入HRP标记的检测抗体,再次温育。
显色:加入底物溶液,避光孵育一定时间后,颜色发生变化。
终止反应:加入终止液,终止显色反应。
测定OD值:用酶标仪在450nm波长下测定各孔的OD值。
计算浓度:根据标准品的OD值和浓度绘制标准曲线,计算样本中TNF-β的浓度。
应用[4][5]
小鼠肿瘤坏死因子β(TNFβ)ELISA试剂盒可以用于精胺普鲁兰多糖-PLGA-CD3纳米粒的制备及其抗肝癌作用初步研究
目的1.合成精胺普鲁兰-乳酸-羟基乙酸共聚物的聚合物PS-PLGA,并制备表面耦联CD3抗体纳米粒PS-PLGA-CD3 NPs,阐明其对T细胞活力、细胞因子分泌及摄取效应的影响;2.探索PS-PLGA-CD3修饰Fe3O4的磁性纳米粒(MNPs),与T细胞孵育后构建趋磁性T细胞的可行性,初步研究趋磁性T细胞的体内外趋磁靶向作用。
方法1.PS-PLGA-CD3 NPs的制备及理化性质表征。合成聚合物PS-PLGA,傅里叶近红外光谱、核磁共振氢谱仪对其结构进行表征;超声透析法制备PS-PLGA NPs,表面耦联CD3抗体制备PS-PLGA-CD3 NPs。透射电镜、纳米粒径和Zeta电位分析仪分别检测PS-PLGA NPs和PS-PLGA-CD3 NPs形态学特征;并采用荧光定量分析法检测其表面耦联CD3抗体含量。2.CCK-8法检测两种纳米粒(PS-PLGA NPs、PS-PLGA-CD3 NPs)对体外T细胞和Hep G2细胞活力的影响;通过小鼠溶血实验和急毒实验评价PS-PLGA-CD3NPs毒性作用。
3. 小鼠肿瘤坏死因子β(TNFβ)ELISA试剂盒ELISA试剂盒测定PS-PLGA-CD3 NPs对T细胞分泌γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子β(TNF-β)的影响;高内涵细胞成像仪与流式细胞仪分别检测T细胞和Hep G2细胞对纳米粒的摄取情况。
4. PS-PLGA-CD3 NPs修饰Fe3O4纳米粒制备修饰型磁性纳米粒(MNPs),孵育法构建趋磁性T细胞;MTT法考察MNPs对T细胞活力的影响;小鼠肿瘤坏死因子β(TNFβ)ELISA试剂盒ELISA试剂盒测定MNPs对T细分泌IFN-γ、IL-2、TNF-β的影响;流式细胞仪检测T细胞对MNPs的摄取情况;在磁场作用下,分别通过高内涵细胞成像仪和小动物光声活体成像仪,检测趋磁性T细胞的体内外趋磁性能。
小鼠肿瘤坏死因子β(TNFβ)ELISA试剂盒结果1.红外光谱和核磁共振氢谱证实成功合成PS-PLGA。PS-PLGA NPs和PS-PLGA-CD3 NPs形态均呈规整球形,粒径均一,粒径分别为121.9±20.3 nm和174.3±27.5 nm。精胺取代度为9.7%的PS-PLGA-CD3 NPs的抗体含量是52.1±9.4μg/mg。2.当浓度在1~200μg/m L之间时,PS-PLGA NPs体外对T细胞的细胞活力无显著影响,而PS-PLGA-CD3 NPs能够显著增强T细胞的细胞活力,并且随纳米粒浓度增加,细胞活力增强作用越明显。PS-PLGA NPs和PS-PLGA-CD3 NPs在浓度范围为5~1000μg/m L对Hep G2细胞的细胞活力均无显著影响;溶血结果显示,PS-PLGA-CD3 NPs无溶血作用;急毒试验结果表明,与对照组相比,在体重、摄食量及主要脏器病理切片均无明显差别。3.T细胞和Hep G2细胞均能有效地摄取PS-PLGA-CD3 NPs。与未耦联抗体组相比较,同一浓度的PS-PLGA-CD3 NPs显著促进T细胞分泌IFN-γ、IL-2、TNF-β这三种细胞因子。4.一定浓度范围MNPs能被T细胞摄取并增强T细胞的细胞活力;显著促进T细胞分泌IFN-γ、IL-2、TNF-β这三种细胞因子;在磁场作用下,趋磁性T细胞在体内外均表现出一定趋磁性能。
参考文献
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[5]陈宏洋.精胺普鲁兰多糖-PLGA-CD3纳米粒的制备及其抗肝癌作用初步研究[D].新乡医学院,2019.