背景[1-3]
大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒是一种用于科研实验的检测工具,主要用于测定大鼠血清、血浆、组织匀浆等相关液体样本中补体因子H(CFH)的含量。以下是关于该试剂盒的详细介绍:
大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒
一、基本信息
产品名称:大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒
检测方法:酶联免疫法(ELISA)
适应物种:大鼠
样本类型:血清、血浆、组织匀浆、细胞上清液、脑脊液、灌洗液、粪便等相关液体样本
保存条件:2-8℃冷藏,保质期通常为半年
用途:仅供科研使用,不得用于临床诊断
二、产品规格与价格
不同供应商提供的大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒规格和价格可能有所不同。例如,有供应商提供48T规格的试剂盒,建议售价为¥1280/盒起;也有供应商提供96T规格的试剂盒,价格可能在¥782至¥1800不等。具体价格请参考各供应商的实际报价。
三、大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒检测原理
ELISA试剂盒的检测原理基于抗原与抗体的特异性反应。在大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒中,已知浓度的标准品和未知浓度的样品被加入微孔酶标板内,通过一系列反应(如包被、洗涤、加样、加酶标记物、显色等),最终产生与样品中补体因子H(CFH)浓度成正比的颜色。使用酶标仪在特定波长(如450nm)下测定吸光度值,并通过标准曲线计算样品浓度。
四、大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒操作步骤
实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。
1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。
3.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
4.每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液)100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
6.依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7.依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。
应用[4][5]
大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒可以用于肾上腺髓质素和补体因子H在糖尿病肾病中的作用的研究
通过体外培养实验观察高浓度与低浓度葡萄糖对肾小球系膜细胞TGF-β1以及细胞外基质表达的影响,以及肾上腺體质素和补体因子H对高糖条件下培养的大鼠肾脏系膜细胞TGF-β1以及细胞外基质过度表达的影响,并且使用大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒观察应用代文、阿托伐他汀和匹格列酮干预后补体因子H和肾上腺髓质素表达的变化。
方法:肾小球系膜细胞分别培养于低糖(5.6mmol/L)和高糖(30mmol/L)及应用肾上腺髓质素、补体因子H、代文、阿托伐他汀和匹格列酮等不同浓度刺激药物的高糖环境中,分别用大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒方法检测细胞上清补体因子H、TGF-β1含量,用RIA方法检测LN和Ⅳ型胶原含量。用RT-PCR方法检测TGF-β1mRNA、AMmRNA以及CfhmRNA的表达情况。用western blot方法检测AM和Cfh蛋白表达的情况。
大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒结果1.高糖状态下TGF-β1、LN和Ⅳ型胶原含量明显增加,联合应用肾上腺髓质素和补体因子H能够显著降低高糖状态下培养的肾脏系膜细胞TGF-β1以及细胞外基质LN和Ⅳ型胶原的含量,且在一定范围内呈现出剂量依赖与时间依赖性。2.高糖状态下培养的肾脏系膜细胞分别应用代文、阿托伐他汀和匹格列酮干预后细胞上清TGF-β1、LN和Ⅳ型胶原的含量较高糖对照组明显减低,TGF-β1mRNA,AMmRNA和CfhmRNA的表达亦较高糖对照组显著减低,AM和Cfh的蛋白表达也较高糖对照组显著降低。
参考文献
[1]Probing BAK and BAX Activation and Pore Assembly with Cytochrome c Release,Limited Proteolysis,and Oxidant-Induced Linkage.[J].Iyer Sweta;;Uren Rachel T;;Kluck Ruth M.Methods in molecular biology(Clifton,N.J.),2019
[2]Mitochondrial replacement therapy and assisted reproductive technology:A paradigm shift toward treatment of genetic diseases in gametes or in early embryos.[J].Tachibana Masahito;;Kuno Takashi;;Yaegashi Nobuo.Reproductive medicine and biology,2018
[3]Improving oocyte quality by transfer of autologous mitochondria from fully grown oocytes.[J].Kristensen Stine Gry;;Pors Susanne Elisabeth;;Andersen Claus Yding.Human reproduction(Oxford,England),2017
[4]Strategies for Controlled Ovarian Stimulation in the Setting of Ovarian Aging.[J].Ata Baris;;Seli Emre.Seminars in reproductive medicine,2015
[5]耿厚法.肾上腺髓质素和补体因子H在糖尿病肾病中的作用的研究[D].南京医科大学,2005.