背景及概述[1][2]
假马齿苋为玄参科植物假马齿苋Bacopamonnieri(L.)Wettst的全草,又名白花猪母菜。在印度使用假马齿苋滋补大脑、改善记忆和智力,如焦虑、认知低下、精神不集中等已有3000年的历史,目前用于治疗精神病和癫痫。假马齿苋促进记忆的主要化学成分是假马齿苋皂苷A和假马齿苋皂苷B,它们最重要的作用是提高认知、记忆功能,以及镇静抗焦虑和抗惊厥抗癫痫等生物活性。在我国主要分布于福建、台湾、广东、云南和四川等地。
假马齿苋药材中含量最高的为假马齿苋皂苷A,其中主要有BacopasideⅠ(简称BacoⅠ,分子量979)、BacopasideⅡ(简称BacoⅡ,分子量929)、BacosideA3(简称BacoA3,分子量929)、BacopasaponinC(简称BacoC,分子量899)以及BacopasaponinCisomer(简称BacoCi,分子量899),它们的母核结构类似,苷元均为jujubogenin(酸枣仁苷元)或pseudojujubogenin(伪酸枣仁苷元),并且BacoⅡ和BacoA3、BacoC和BacoCi互为同分异构体。本专利分离纯化后检测的假马齿苋皂甙含量均指这5个成分的液相含量总和。
专利CN1303098C提到了一种制备假马齿苋皂甙的方法,原料乙醇提取,大孔树脂分离,RP-18低压柱或HPLC高效液相色谱纯化,得到3种假马齿苋皂甙,分别为BacoⅠ、BacoC和BacoD。该专利采用多歩柱层析的方法进行纯化,周期长、成本高、不适用于工业化生产。
专利CN1833692B也提到了一种假马齿苋皂甙的制备方法,原料采用40-80%乙醇提取,浓缩后再经大孔吸附树脂纯化,直接采用10-95%乙醇洗脱,或先用10-60%乙醇洗脱,再用60-95%乙醇洗脱,可将假马齿苋皂甙含量提高到20-80%(以假马齿苋皂苷A计)。该专利通过树脂纯化,工艺周期长、试剂损耗大、且有效成分回收率低(80%含量的产品,回收率仅1.17%),不利于工业化生产。
制备[2]
步骤1-碱醇提取:
将原料假马齿苋粉碎,采用原料质量3-5倍量且质量浓度为10%-30%乙醇溶液提取,浓缩干燥提取液,粉碎,所得样品备用;所述乙醇溶液内含乙醇溶液质量0.3%-0.8%的氢氧化钠、碳酸钠、氧化镁或氨水中任意一种;
步骤2-料液澄清:
向步骤1所得样品中加入质量5-10倍量质量浓度为90%-95%乙醇溶液,搅拌,过滤,减压浓缩,再加入絮凝剂搅拌,过滤,收集滤液,然后向滤液中加入活性炭脱色,再过滤,继续收集滤液;所述絮凝剂是质量浓度为0.8%-1.2%的阳离子絮凝剂、阴离子絮凝剂或复合离子絮凝剂;
步骤3-膜分离:
将步骤2所得的滤液通过超滤膜过滤,收集透过液,然后将透过液用纳滤膜过滤,收集浓缩液,浓缩干燥后即得假马齿苋皂甙粗品;所述超滤膜的截留分子量为2000~3000或3000~5000中的一种;所述纳滤膜的截留分子量为400~500或500~600中的一种。
步骤4-纯化:
将步骤3所得的假马齿苋皂甙粗品粉碎,加入质量1-2倍量的有机溶剂溶解,过滤,收集不溶物进行干燥,即得的假马齿苋皂甙;所述有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯或丙酮中的一种或任意多种组合。
上述步骤1的优选方案是:将原料假马齿苋粉碎,采用原料质量3-5倍量且质量浓度为10%-30%乙醇溶液提取两次,合并提取液并浓缩干燥,粉碎过80目筛,所得样品备用;所述乙醇溶液内含乙醇溶液质量0.3%-0.8%的氢氧化钠、碳酸钠、氧化镁或氨水中任意一种(假马齿苋原料中含有有机酸类及Monnieraside等酸性物质,假马齿苋皂甙结构中的缩酮在酸性条件下不稳定,因此加碱增加其稳定性)。
上述步骤2的优选方案是:向步骤1所得样品中加入质量5-10倍量质量浓度为90%-95%乙醇溶液,搅拌溶解,过滤,减压浓缩至液体体积的1/10-1/5,再加入絮凝剂搅拌,过滤,收集滤液,然后向滤液中加入活性炭脱色,再过滤,继续收集滤液;所述絮凝剂是质量浓度为0.8%-1.2%的阳离子絮凝剂、阴离子絮凝剂或复合离子絮凝剂;所述活性炭的型号为767活性炭、320活性炭、303活性炭或HB-F活性炭中的一种或任意多种的混合。
上述步骤2中絮凝剂与浓缩后液体的质量比为0.03-0.05:1;所述活性炭和絮凝剂澄清后滤液的质量比为0.01-0.03。上述步骤4的优选方案是:将步骤3所得的假马齿苋皂甙粗品粉碎,过80目筛,加入质量1-2倍量的丙酮溶解,过滤,收集不溶物进行干燥,即得假马齿苋皂甙。
本方法的优点:
通过碱醇提取、高醇溶解、絮凝剂澄清、活性炭脱色等工艺除去大量的脂溶性杂质及水溶性杂质,进而根据上述5种假马齿苋皂甙的分子量采用膜分离手段将其进一步细分离,有机试剂洗涤纯化,从而将这5种成分液相含量总和提高至85%以上,避免了树脂分离等复杂工艺,成本低,周期短,可操作性强,产品回收率2.2%左右,质量稳定,适用于工业化生产。
主要参考资料
[1] 李元元. (2014). 假马齿苋皂苷Ⅰ治疗阿尔兹海默症的药效及作用机制研究. (Doctoral dissertation, 第二军医大学).
[2] 崔雨晴, 张继全, 吴飞, & 阮克锋. (2016). 一测多评法测定假马齿苋中间体中的5种三萜皂苷类成分含量. 上海中医药杂志(7), 88-93.
[3] 崔雨晴, 张继全, 吴飞, 胡佳亮, 阮克锋, & 冯怡. (2017). Hplc同时测定不同产地假马齿苋中的5个三萜皂苷类成分. 药物分析杂志(2), 54-60.