背景及概述[1][2]
假马齿苋为玄参科植物假马齿苋Bacopamonnieri(L.)Wettst的全草，又名白花猪母菜。在印度使用假马齿苋滋补大脑、改善记忆和智力，如焦虑、认知低下、精神不集中等已有3000年的历史，目前用于治疗精神病和癫痫。假马齿苋促进记忆的主要化学成分是假马齿苋皂苷A和假马齿苋皂苷B，它们最重要的作用是提高认知、记忆功能，以及镇静抗焦虑和抗惊厥抗癫痫等生物活性。在我国主要分布于福建、台湾、广东、云南和四川等地。
假马齿苋药材中含量最高的为假马齿苋皂苷A，其中主要有BacopasideⅠ(简称BacoⅠ，分子量979)、BacopasideⅡ(简称BacoⅡ，分子量929)、BacosideA3(简称BacoA3，分子量929)、BacopasaponinC(简称BacoC，分子量899)以及BacopasaponinCisomer(简称BacoCi，分子量899)，它们的母核结构类似，苷元均为jujubogenin(酸枣仁苷元)或pseudojujubogenin(伪酸枣仁苷元)，并且BacoⅡ和BacoA3、BacoC和BacoCi互为同分异构体。本专利分离纯化后检测的假马齿苋皂甙含量均指这5个成分的液相含量总和。
专利CN1303098C提到了一种制备假马齿苋皂甙的方法，原料乙醇提取，大孔树脂分离，RP-18低压柱或HPLC高效液相色谱纯化，得到3种假马齿苋皂甙，分别为BacoⅠ、BacoC和BacoD。该专利采用多歩柱层析的方法进行纯化，周期长、成本高、不适用于工业化生产。
专利CN1833692B也提到了一种假马齿苋皂甙的制备方法，原料采用40-80％乙醇提取，浓缩后再经大孔吸附树脂纯化，直接采用10-95％乙醇洗脱，或先用10-60％乙醇洗脱，再用60-95％乙醇洗脱，可将假马齿苋皂甙含量提高到20-80％(以假马齿苋皂苷A计)。该专利通过树脂纯化，工艺周期长、试剂损耗大、且有效成分回收率低(80％含量的产品，回收率仅1.17％)，不利于工业化生产。
制备[2]
步骤1-碱醇提取：
将原料假马齿苋粉碎，采用原料质量3-5倍量且质量浓度为10％-30％乙醇溶液提取，浓缩干燥提取液，粉碎，所得样品备用；所述乙醇溶液内含乙醇溶液质量0.3％-0.8％的氢氧化钠、碳酸钠、氧化镁或氨水中任意一种；
步骤2-料液澄清：
向步骤1所得样品中加入质量5-10倍量质量浓度为90％-95％乙醇溶液，搅拌，过滤，减压浓缩，再加入絮凝剂搅拌，过滤，收集滤液，然后向滤液中加入活性炭脱色，再过滤，继续收集滤液；所述絮凝剂是质量浓度为0.8％-1.2％的阳离子絮凝剂、阴离子絮凝剂或复合离子絮凝剂；
步骤3-膜分离：
将步骤2所得的滤液通过超滤膜过滤，收集透过液，然后将透过液用纳滤膜过滤，收集浓缩液，浓缩干燥后即得假马齿苋皂甙粗品；所述超滤膜的截留分子量为2000～3000或3000～5000中的一种；所述纳滤膜的截留分子量为400～500或500～600中的一种。
步骤4-纯化：
将步骤3所得的假马齿苋皂甙粗品粉碎，加入质量1-2倍量的有机溶剂溶解，过滤，收集不溶物进行干燥，即得的假马齿苋皂甙；所述有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯或丙酮中的一种或任意多种组合。
上述步骤1的优选方案是：将原料假马齿苋粉碎，采用原料质量3-5倍量且质量浓度为10％-30％乙醇溶液提取两次，合并提取液并浓缩干燥，粉碎过80目筛，所得样品备用；所述乙醇溶液内含乙醇溶液质量0.3％-0.8％的氢氧化钠、碳酸钠、氧化镁或氨水中任意一种(假马齿苋原料中含有有机酸类及Monnieraside等酸性物质，假马齿苋皂甙结构中的缩酮在酸性条件下不稳定，因此加碱增加其稳定性)。
上述步骤2的优选方案是：向步骤1所得样品中加入质量5-10倍量质量浓度为90％-95％乙醇溶液，搅拌溶解，过滤，减压浓缩至液体体积的1/10-1/5，再加入絮凝剂搅拌，过滤，收集滤液，然后向滤液中加入活性炭脱色，再过滤，继续收集滤液；所述絮凝剂是质量浓度为0.8％-1.2％的阳离子絮凝剂、阴离子絮凝剂或复合离子絮凝剂；所述活性炭的型号为767活性炭、320活性炭、303活性炭或HB-F活性炭中的一种或任意多种的混合。
上述步骤2中絮凝剂与浓缩后液体的质量比为0.03-0.05:1；所述活性炭和絮凝剂澄清后滤液的质量比为0.01-0.03。上述步骤4的优选方案是：将步骤3所得的假马齿苋皂甙粗品粉碎，过80目筛，加入质量1-2倍量的丙酮溶解，过滤，收集不溶物进行干燥，即得假马齿苋皂甙。
本方法的优点：
通过碱醇提取、高醇溶解、絮凝剂澄清、活性炭脱色等工艺除去大量的脂溶性杂质及水溶性杂质，进而根据上述5种假马齿苋皂甙的分子量采用膜分离手段将其进一步细分离，有机试剂洗涤纯化，从而将这5种成分液相含量总和提高至85％以上，避免了树脂分离等复杂工艺，成本低，周期短，可操作性强，产品回收率2.2％左右，质量稳定，适用于工业化生产。
主要参考资料
[1] 李元元. (2014). 假马齿苋皂苷Ⅰ治疗阿尔兹海默症的药效及作用机制研究. (Doctoral dissertation, 第二军医大学).
[2] 崔雨晴, 张继全, 吴飞, & 阮克锋. (2016). 一测多评法测定假马齿苋中间体中的5种三萜皂苷类成分含量. 上海中医药杂志(7), 88-93.
[3] 崔雨晴, 张继全, 吴飞, 胡佳亮, 阮克锋, & 冯怡. (2017). Hplc同时测定不同产地假马齿苋中的5个三萜皂苷类成分. 药物分析杂志(2), 54-60.