杜仲提取物(绿原酸)
中文名称 | 杜仲提取物(绿原酸) |
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中文同义词 | 杜仲提取物(绿原酸) |
英文名称 | Chlorogenic acid |
英文同义词 | |
CAS号 | |
分子式 | |
分子量 | 0 |
EINECS号 | |
相关类别 | |
Mol文件 | Mol File |
结构式 |
杜仲提取物(绿原酸) 性质
杜仲提取物以杜仲科植物杜仲 (Eucommia uimoides Oliv) 的干燥树皮及叶为原料提取,活性成分主要有木脂素类、环烯醚菇类、苯丙素类以及其它菇类化合物, 还有多糖、黄酮、酚类等。绿原酸是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。绿原酸是一种重要的生物活性物质,具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用。其应用非常广泛,主要用于医药、日用化工和食品等行业。本信息是由Chemicalbook的林香云编辑整理。【基源】为杜仲科杜仲属植物杜仲的干燥树皮及枝、叶。
【别名】丝连皮、木棉、思仙、思仲、石思仙、檰等。
【植物形态】落叶乔木,高8~20m,胸径可达50cm;树皮粗糙,灰褐色,皮、枝及叶均含胶质,折断可拉出多数白色细丝。单叶互生,叶柄长1~2cm;叶片薄革质,椭圆形或近卵形,长7~15cm,宽3.5~6.5cm,基部圆形或阔楔形,边缘有锯齿,顶端渐尖或尾尖,上面暗绿色,幼叶有褐色柔毛,老叶仅下面叶脉处被疏毛,叶面略有皱纹;侧脉6~9对。花单性,雌雄异株,生于当年枝基部;雄花无花被,花梗长约3mm;苞片倒卵状匙形,长6~9mm,边缘有睫毛,早落;雄蕊6~10枚,花药细长,药隔突出;雌花单生,苞片倒卵形,花梗长8mm,子房无毛,扁而长,先端2裂。翅果扁平,长椭圆形,长3~3.5cm,宽1~1.3cm,先端下凹,周围具薄翅。种子1粒,扁平,线形,长1.2~1.5cm,宽约3mm。花期4~5月,果期9月。
【生境与分布】生于海拔300~500m的低山谷地、低坡。分布于陕西、甘肃、江苏、浙江、河南、四川、贵州、云南。现中国各地广泛栽培。
![杜仲](/NewsImg/2015-07-08/20157817341636514.jpg)
图1为杜仲1.木脂素类 从杜仲分离出的木脂素类化合物已有27种, 包括双环氧木质素类( 如松脂素单糖甙、松脂素二糖甙或称松脂醇二葡萄糖甙, 中脂素、中脂素单糖甙, 中脂素二糖甙、丁香素,丁香素单糖甙、丁香素二糖甙);单环氧木质素类(如橄榄素、橄榄素二糖甙)、环木质素类( 如橄榄素);新木质素类( 如二经基脱氢二松柏醇、柑桔素B );倍半木质素类(如耳草素二糖甙)等。其中松脂素二糖甙为杜仲皮主要降压成分,丁香素二糖甙有抗癌活性, 一些木质素类化合物对CAMP磷酸二醋酶有强的抑制活性, 故可成为血管扩张剂。
2.环烯醚枯类 目前已从皮和叶内分离出15种环烯醚菇类化合物。包括京尼平甙、京尼平甙酸、桃叶珊瑚甙、杜仲甙、筋骨草甙、京尼平贰酸三、四聚体及其乙酸醋等。其中京尼平贰酸具有预防性功能低下、增强记忆功能抗癌、抗氧化(抗衰老)、泻下、促进胆汁分泌及降压作用; 京尼平贰具有抗肿瘤活性, 并具有抗补体性;桃叶珊瑚贰对革兰氏阴性菌和阳性菌均有抑制作用;具有较强的镇痛、抗菌消炎作用, 临床上可用于促进伤口愈合,还能够加快副交感神经中枢, 加快尿酸转移和排出, 利尿作用明显。在种子含量可高达19 % ~ 23 %。
3.苯丙素类 苯丙素类物质广泛存在于杜仲根皮、茎皮、绿叶、落叶中, 包括氯原酸、氛原酸甲醋、咖啡酸、松柏酸、松柏贰、丁香贰、香草酸等11种。杜仲全树均含有氯原酸, 杜仲叶抓原酸含量可达5.28 % ,是杜仲皮的18.75 倍。氯原酸抗菌作用较强, 具有利胆、降压、抗菌、消炎、止血、抗氧化及升高白细胞的作用, 对急性咽喉炎及皮肤病有明显疗效, 对月经过多、子宫功能性出血有良好的止血效果, 并且有肾上腺素类似的作用。
4.其它菇类 目前从杜仲皮中分离出来的其它枯类物质主要有白桦脂醇、白桦脂酸、熊果酸、B一谷菌醇、胡萝卜贰等。
5.多糖类 从杜仲皮内分离出杜仲糖A 和杜仲糖B 。杜仲糖A 为酸性多糖, 其组成为L 一阿拉伯糖: D一半乳糖: D一葡萄糖: L 一鼠李糖: 半乳糖醛酸的摩尔比为8 : 6 : 4 : 5 : 8;杜仲糖B 为一种聚糖, 由一种鼠李糖和半乳糖组成。以上两种多糖均对网状内皮系统有活化作用, 可增强肌体非特异性免疫功能。
绿原酸:分子式C16H18O9,分子量354.30,半水合物为针状结晶(水)。110℃变为无水化合物,熔点208℃,[α]26D-35.2°(c=2.8)。25℃水中溶解度为4%,热水中溶解度更大,易溶于乙醇及丙酮,极微溶于醋酸乙酯。绿原酸具有广泛的抗菌作用,可提高中枢兴奋性,并有利胆、止血、增高白血球及抗病毒作用。
![结构式](/NewsImg/2015-07-08/20157818441410170.jpg)
图2为结构式1.抗氧化、清除体内自由基作用
绿原酸及其衍生物具有比抗坏血酸、咖啡酸和生育酚(维生素E)更强的自由基清除效果,可有效清除DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基,还可抑制低密度脂蛋白的氧化。绿原酸对有效地清除体内自由基、维持机体细胞正常的结构和功能、防止和延缓肿瘤突变和衰老等现象的发生具有重要作用。
2.抗菌、抗病毒作用
绿原酸和异绿原酸对多种致病菌,如金黄葡萄球菌、溶血性链球菌、痢疾球菌、伤寒杆菌、肺炎球菌等有显著的抑制和杀灭作用,其抗菌机制与非竞争性抑制细菌体内的芳基胺乙酰转移酶(NAT)有关。绿原酸对急性咽喉炎症及皮肤病有明显疗效,临床上用于治疗急性细菌性感染疾病。有文献报道,绿原酸具有抗病毒、止血、增高白血球,缩短血凝和出血时间等作用。
3.抗突变、抗肿瘤作用
绿原酸具有较强的抑制突变能力,可抑制黄曲霉素B引发的突变及亚消化反应引发的突变,并能有效地降低γ射线引起的骨髓红细胞突变;绿原酸可通过降低致癌物的利用率及其在肝脏中的运输来达到防癌、抗癌的效果。绿原酸对大肠癌、肝癌和喉癌具有显著的抑制作用,被认为是癌症的有效化学防护剂。
4.对心血管保护作用
绿原酸作为一种自由基清除剂及抗氧化剂已被大量的试验证明,绿原酸的这种生物活性,对心血管系统能产生保护作用。绿原酸通过清除自由基及抗脂质过氧化,可保护血管内皮细胞,进而在防治动脉粥样硬化、血栓栓塞性疾病及高血压病等方面发挥作用。
5.降胆固醇作用
杜仲醇提取液灌服大鼠后,血清总胆固醇明显低于对照组,证明杜仲具有抑制胆固醇吸收作用。
6.骨细胞增殖作用
杜仲的水提液及水提液的不同萃取物和UMR106成骨样细胞体外共同培养,结果显示,水提液在0.4克/升培养48小时具有最强的促进细胞增殖作用,其乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物对细胞增殖有一定的促进作用,而萃取后的剩余水层仍保留与原水层相似的促进细胞增殖作用。
7.免疫调节
杜仲叶浸提物制剂可增加环磷酰胺损伤小鼠脾重、脾组织RNA、蛋白合成,提高血液中自然杀伤细胞活性,脾淋巴细胞增殖加快,而对正常小鼠脾抗体形成细胞无明显影响。
8.性激素和促性激素样作用
杜仲提取物能增加动物前列腺、卵巢、睾丸、肛提肌等重量。杜仲叶提取物的提取方法如下
取一定量的杜仲叶,加10倍的水,煎煮0.5h,将水滤出;再加5倍的水,煎煮0.5h,将水滤出;将两次的滤液混合,煎熬浓缩到有效成分与水的比例为1∶1时,静止冷藏12h以上,然后在2500r/min的速度下离心30min,使之呈膏状;最后在-0.09MPa和60℃的条件下进行减压干燥,得到干膏,再按常规方法将其粉碎成粉状即可。
绿原酸提取
通常利用乙醇、丙酮、甲醇等极性有机溶剂从植物中提取绿原酸,但由于绿原酸本身的不稳定性,提取时应避免高温、强光及长时间加热。
(1)石硫醇法:将提取液浓缩→用20wt%的石灰乳调节pH至l2→过滤沉淀物→加2倍量乙醇混悬→用体积分数为50%的HSO4将pH值调为3—4→充分搅拌→过滤→滤液用质量分数为40%的NaOH中和至中性→过滤→浓缩→干燥→得绿原酸粗品
(2)水提醇析法:利用绿原酸易溶于水这个特性,以水为溶剂,加热煮沸提取,然后用高浓度醇沉淀蛋白质、粘液质、多糖体等杂质。
(3)醇提一铅盐沉淀法:用乙醇提取→提取液真空浓缩制成浸膏→加水转溶→加铅盐沉淀→过滤沉淀物→加20%的硫酸溶解沉淀→析出绿原酸→用乙酸乙酯萃取→浓缩析出粗品→重结晶→纯品杜仲叶中的绿原酸的含量测定
色谱条件 色谱柱:Shim-pack CLC-ODS C18柱(150mm×6.0mm,5μm);流动相:甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾缓冲液(25:75) (pH3.9);流速:1.0mL/min;检测波长:328nm;柱温:40℃。
供试品的制备 取本品粉末(过六号筛)约0.5g,置于25ml量瓶中,加甲酸-甲醇溶液(5:95)至刻度,摇匀,于室温下浸渍2h,超声30min,滤过。精确吸取续滤液5ml置于10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过。按本法色谱条件进行测定,结果见图3。
![杜仲叶中的绿原酸的HPLC图a对照品;b样品1绿原酸](/NewsImg/2015-07-08/2015781828917024.jpg)
图3为杜仲叶中的绿原酸的HPLC图
a对照品;b样品1绿原酸性状鉴别
皮板片状,少数为卷片,厚3~7mm;外表面淡灰棕色,有不规则纵槽及裂纹,并有斜方形皮孔,较厚者已刮去部分栓皮,显淡棕色而较平滑;内表面红紫色或紫褐色,光滑。质硬脆,折断面有绵密的银白色胶丝相连。以皮厚、完整、去净粗皮、断面丝多者为佳。
显微鉴别
树皮横切面:木栓组织有2~7个层带,每层带多为2~5列内壁特别增厚且木化的木检细胞组成,在两个栓层之间为被推出的颓废皮层组织,细胞间散有石细胞群。韧皮部有5~7条木化的石细胞环带,每环带为3~5列石细胞,并偶伴有少数纤维;射线2~3列细胞,穿过石细胞环向外辐射,近石细胞环处可见胶丝团块。 粉末:深灰棕色。①石细胞大多成群,类长方形、类方形、类圆形、多角形或不规则形,直径32~80μm,长至180μm,壁厚6~28μm,大多厚薄不匀,孔沟明显,有的分枝,胞腔大小不一,有的含橡胶质团块。②橡胶丝细长条状,稍弯曲或扭曲成团,直径8~16μm,表面略粗糙,显颗粒性。③木栓细胞表面观多角形,直径16~42μm,壁不均匀增厚,木化,纹孔细小而明显,胞腔内常含橙红色物;断面观略呈长方形,壁一边薄,另边甚厚,孔沟明显。④筛管分子端壁复筛板的筛域椭圆形,较大;侧壁上的筛域较小,类圆形。
理化鉴别
取样品粉末适量,用水煎煮,滤过,滤液用铅盐法沉淀,脱铅液点于硅胶G板上,以正丁醇-醋酸-水(4:1:1)为展开剂,展开后,喷三氯化铁试剂显色。另取上述脱铅液适量,浓缩,用氢氧化钾碱化,热回流水解,用盐酸酸化至pH2~3,用乙醚萃取,萃取液上硅胶柱层析,用含5%甲醇氯仿液洗脱,洗脱液点于硅胶G板上,以正丁醇-醋酸-水(5:1:1)为展开剂,展开后,喷三氯化铁试剂显色。杜仲叶提取液中通常含有较多有色物质, 使得溶液颜色较深, 如不除去则为后续纯化操作带来麻烦。因此有必要对杜仲叶提取液进行脱色, 作者选择活性炭进行脱色研究。通常用于中药提取液脱色的是粉末状活性炭, 具有很强的吸附能力, 可以将溶液中的有色物质吸附在表面上, 从而达到脱色的目的。使用前活性炭需进行预处理, 将适量粉末状活性炭(100 ~ 120 目)于120 ℃下加热活化4 ~ 5 h , 以除去所吸附的气体。将杜仲叶提取物加入到化妆品中,即可制得杜仲叶提取物化妆品。
【原料配伍】杜仲叶提取物在化妆品中质量份配比范围是0.3~1,优选为0.4~0.8,最优选为0.5。
化妆品可选自美容霜、晚霜、眼霜、洗面奶、紧肤水、按摩膏、去皱精华素和面膜等。
【产品应用】杜仲叶提取物可添加到多种形式的化妆品中,用于护肤、去皱、抗衰老。
【产品特性】杜仲叶提取物能与各种化妆品很好地融为一体,工艺简单,成本较低;化妆品使用安全,效果显著。杜仲皮、叶水煎剂ip小鼠LD50分别为17.30±0.52g/kg,8.64±0.59g/kg。大鼠亚急性毒性表明,杜仲皮、叶水煎剂及皮、叶醇提取物1.75g/kg,3.5g/kg ig21d,未见明显毒性(肝、肾、白细胞数)[2]。豚鼠ip 10~15g/kg,3~5d内半数死亡[1]。犬ip 35%煎剂10 ml/d,42d后镜检对心,肝及脾组织无病变,仅肾小管上皮细胞有轻度变性,豚鼠及大鼠情况相同。性味归经 甘、微辛,温。归肝、肾经。
功能主治 补肝肾,强筋骨,安胎。主治腰膝酸软,足膝痿弱,小便余沥,阴下湿痒,胎漏欲下,高血压等。
【别名】丝连皮、木棉、思仙、思仲、石思仙、檰等。
【植物形态】落叶乔木,高8~20m,胸径可达50cm;树皮粗糙,灰褐色,皮、枝及叶均含胶质,折断可拉出多数白色细丝。单叶互生,叶柄长1~2cm;叶片薄革质,椭圆形或近卵形,长7~15cm,宽3.5~6.5cm,基部圆形或阔楔形,边缘有锯齿,顶端渐尖或尾尖,上面暗绿色,幼叶有褐色柔毛,老叶仅下面叶脉处被疏毛,叶面略有皱纹;侧脉6~9对。花单性,雌雄异株,生于当年枝基部;雄花无花被,花梗长约3mm;苞片倒卵状匙形,长6~9mm,边缘有睫毛,早落;雄蕊6~10枚,花药细长,药隔突出;雌花单生,苞片倒卵形,花梗长8mm,子房无毛,扁而长,先端2裂。翅果扁平,长椭圆形,长3~3.5cm,宽1~1.3cm,先端下凹,周围具薄翅。种子1粒,扁平,线形,长1.2~1.5cm,宽约3mm。花期4~5月,果期9月。
【生境与分布】生于海拔300~500m的低山谷地、低坡。分布于陕西、甘肃、江苏、浙江、河南、四川、贵州、云南。现中国各地广泛栽培。
![杜仲](/NewsImg/2015-07-08/20157817341636514.jpg)
图1为杜仲1.木脂素类 从杜仲分离出的木脂素类化合物已有27种, 包括双环氧木质素类( 如松脂素单糖甙、松脂素二糖甙或称松脂醇二葡萄糖甙, 中脂素、中脂素单糖甙, 中脂素二糖甙、丁香素,丁香素单糖甙、丁香素二糖甙);单环氧木质素类(如橄榄素、橄榄素二糖甙)、环木质素类( 如橄榄素);新木质素类( 如二经基脱氢二松柏醇、柑桔素B );倍半木质素类(如耳草素二糖甙)等。其中松脂素二糖甙为杜仲皮主要降压成分,丁香素二糖甙有抗癌活性, 一些木质素类化合物对CAMP磷酸二醋酶有强的抑制活性, 故可成为血管扩张剂。
2.环烯醚枯类 目前已从皮和叶内分离出15种环烯醚菇类化合物。包括京尼平甙、京尼平甙酸、桃叶珊瑚甙、杜仲甙、筋骨草甙、京尼平贰酸三、四聚体及其乙酸醋等。其中京尼平贰酸具有预防性功能低下、增强记忆功能抗癌、抗氧化(抗衰老)、泻下、促进胆汁分泌及降压作用; 京尼平贰具有抗肿瘤活性, 并具有抗补体性;桃叶珊瑚贰对革兰氏阴性菌和阳性菌均有抑制作用;具有较强的镇痛、抗菌消炎作用, 临床上可用于促进伤口愈合,还能够加快副交感神经中枢, 加快尿酸转移和排出, 利尿作用明显。在种子含量可高达19 % ~ 23 %。
3.苯丙素类 苯丙素类物质广泛存在于杜仲根皮、茎皮、绿叶、落叶中, 包括氯原酸、氛原酸甲醋、咖啡酸、松柏酸、松柏贰、丁香贰、香草酸等11种。杜仲全树均含有氯原酸, 杜仲叶抓原酸含量可达5.28 % ,是杜仲皮的18.75 倍。氯原酸抗菌作用较强, 具有利胆、降压、抗菌、消炎、止血、抗氧化及升高白细胞的作用, 对急性咽喉炎及皮肤病有明显疗效, 对月经过多、子宫功能性出血有良好的止血效果, 并且有肾上腺素类似的作用。
4.其它菇类 目前从杜仲皮中分离出来的其它枯类物质主要有白桦脂醇、白桦脂酸、熊果酸、B一谷菌醇、胡萝卜贰等。
5.多糖类 从杜仲皮内分离出杜仲糖A 和杜仲糖B 。杜仲糖A 为酸性多糖, 其组成为L 一阿拉伯糖: D一半乳糖: D一葡萄糖: L 一鼠李糖: 半乳糖醛酸的摩尔比为8 : 6 : 4 : 5 : 8;杜仲糖B 为一种聚糖, 由一种鼠李糖和半乳糖组成。以上两种多糖均对网状内皮系统有活化作用, 可增强肌体非特异性免疫功能。
绿原酸:分子式C16H18O9,分子量354.30,半水合物为针状结晶(水)。110℃变为无水化合物,熔点208℃,[α]26D-35.2°(c=2.8)。25℃水中溶解度为4%,热水中溶解度更大,易溶于乙醇及丙酮,极微溶于醋酸乙酯。绿原酸具有广泛的抗菌作用,可提高中枢兴奋性,并有利胆、止血、增高白血球及抗病毒作用。
![结构式](/NewsImg/2015-07-08/20157818441410170.jpg)
图2为结构式1.抗氧化、清除体内自由基作用
绿原酸及其衍生物具有比抗坏血酸、咖啡酸和生育酚(维生素E)更强的自由基清除效果,可有效清除DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基,还可抑制低密度脂蛋白的氧化。绿原酸对有效地清除体内自由基、维持机体细胞正常的结构和功能、防止和延缓肿瘤突变和衰老等现象的发生具有重要作用。
2.抗菌、抗病毒作用
绿原酸和异绿原酸对多种致病菌,如金黄葡萄球菌、溶血性链球菌、痢疾球菌、伤寒杆菌、肺炎球菌等有显著的抑制和杀灭作用,其抗菌机制与非竞争性抑制细菌体内的芳基胺乙酰转移酶(NAT)有关。绿原酸对急性咽喉炎症及皮肤病有明显疗效,临床上用于治疗急性细菌性感染疾病。有文献报道,绿原酸具有抗病毒、止血、增高白血球,缩短血凝和出血时间等作用。
3.抗突变、抗肿瘤作用
绿原酸具有较强的抑制突变能力,可抑制黄曲霉素B引发的突变及亚消化反应引发的突变,并能有效地降低γ射线引起的骨髓红细胞突变;绿原酸可通过降低致癌物的利用率及其在肝脏中的运输来达到防癌、抗癌的效果。绿原酸对大肠癌、肝癌和喉癌具有显著的抑制作用,被认为是癌症的有效化学防护剂。
4.对心血管保护作用
绿原酸作为一种自由基清除剂及抗氧化剂已被大量的试验证明,绿原酸的这种生物活性,对心血管系统能产生保护作用。绿原酸通过清除自由基及抗脂质过氧化,可保护血管内皮细胞,进而在防治动脉粥样硬化、血栓栓塞性疾病及高血压病等方面发挥作用。
5.降胆固醇作用
杜仲醇提取液灌服大鼠后,血清总胆固醇明显低于对照组,证明杜仲具有抑制胆固醇吸收作用。
6.骨细胞增殖作用
杜仲的水提液及水提液的不同萃取物和UMR106成骨样细胞体外共同培养,结果显示,水提液在0.4克/升培养48小时具有最强的促进细胞增殖作用,其乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物对细胞增殖有一定的促进作用,而萃取后的剩余水层仍保留与原水层相似的促进细胞增殖作用。
7.免疫调节
杜仲叶浸提物制剂可增加环磷酰胺损伤小鼠脾重、脾组织RNA、蛋白合成,提高血液中自然杀伤细胞活性,脾淋巴细胞增殖加快,而对正常小鼠脾抗体形成细胞无明显影响。
8.性激素和促性激素样作用
杜仲提取物能增加动物前列腺、卵巢、睾丸、肛提肌等重量。杜仲叶提取物的提取方法如下
取一定量的杜仲叶,加10倍的水,煎煮0.5h,将水滤出;再加5倍的水,煎煮0.5h,将水滤出;将两次的滤液混合,煎熬浓缩到有效成分与水的比例为1∶1时,静止冷藏12h以上,然后在2500r/min的速度下离心30min,使之呈膏状;最后在-0.09MPa和60℃的条件下进行减压干燥,得到干膏,再按常规方法将其粉碎成粉状即可。
绿原酸提取
通常利用乙醇、丙酮、甲醇等极性有机溶剂从植物中提取绿原酸,但由于绿原酸本身的不稳定性,提取时应避免高温、强光及长时间加热。
(1)石硫醇法:将提取液浓缩→用20wt%的石灰乳调节pH至l2→过滤沉淀物→加2倍量乙醇混悬→用体积分数为50%的HSO4将pH值调为3—4→充分搅拌→过滤→滤液用质量分数为40%的NaOH中和至中性→过滤→浓缩→干燥→得绿原酸粗品
(2)水提醇析法:利用绿原酸易溶于水这个特性,以水为溶剂,加热煮沸提取,然后用高浓度醇沉淀蛋白质、粘液质、多糖体等杂质。
(3)醇提一铅盐沉淀法:用乙醇提取→提取液真空浓缩制成浸膏→加水转溶→加铅盐沉淀→过滤沉淀物→加20%的硫酸溶解沉淀→析出绿原酸→用乙酸乙酯萃取→浓缩析出粗品→重结晶→纯品杜仲叶中的绿原酸的含量测定
色谱条件 色谱柱:Shim-pack CLC-ODS C18柱(150mm×6.0mm,5μm);流动相:甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾缓冲液(25:75) (pH3.9);流速:1.0mL/min;检测波长:328nm;柱温:40℃。
供试品的制备 取本品粉末(过六号筛)约0.5g,置于25ml量瓶中,加甲酸-甲醇溶液(5:95)至刻度,摇匀,于室温下浸渍2h,超声30min,滤过。精确吸取续滤液5ml置于10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过。按本法色谱条件进行测定,结果见图3。
![杜仲叶中的绿原酸的HPLC图a对照品;b样品1绿原酸](/NewsImg/2015-07-08/2015781828917024.jpg)
图3为杜仲叶中的绿原酸的HPLC图
a对照品;b样品1绿原酸性状鉴别
皮板片状,少数为卷片,厚3~7mm;外表面淡灰棕色,有不规则纵槽及裂纹,并有斜方形皮孔,较厚者已刮去部分栓皮,显淡棕色而较平滑;内表面红紫色或紫褐色,光滑。质硬脆,折断面有绵密的银白色胶丝相连。以皮厚、完整、去净粗皮、断面丝多者为佳。
显微鉴别
树皮横切面:木栓组织有2~7个层带,每层带多为2~5列内壁特别增厚且木化的木检细胞组成,在两个栓层之间为被推出的颓废皮层组织,细胞间散有石细胞群。韧皮部有5~7条木化的石细胞环带,每环带为3~5列石细胞,并偶伴有少数纤维;射线2~3列细胞,穿过石细胞环向外辐射,近石细胞环处可见胶丝团块。 粉末:深灰棕色。①石细胞大多成群,类长方形、类方形、类圆形、多角形或不规则形,直径32~80μm,长至180μm,壁厚6~28μm,大多厚薄不匀,孔沟明显,有的分枝,胞腔大小不一,有的含橡胶质团块。②橡胶丝细长条状,稍弯曲或扭曲成团,直径8~16μm,表面略粗糙,显颗粒性。③木栓细胞表面观多角形,直径16~42μm,壁不均匀增厚,木化,纹孔细小而明显,胞腔内常含橙红色物;断面观略呈长方形,壁一边薄,另边甚厚,孔沟明显。④筛管分子端壁复筛板的筛域椭圆形,较大;侧壁上的筛域较小,类圆形。
理化鉴别
取样品粉末适量,用水煎煮,滤过,滤液用铅盐法沉淀,脱铅液点于硅胶G板上,以正丁醇-醋酸-水(4:1:1)为展开剂,展开后,喷三氯化铁试剂显色。另取上述脱铅液适量,浓缩,用氢氧化钾碱化,热回流水解,用盐酸酸化至pH2~3,用乙醚萃取,萃取液上硅胶柱层析,用含5%甲醇氯仿液洗脱,洗脱液点于硅胶G板上,以正丁醇-醋酸-水(5:1:1)为展开剂,展开后,喷三氯化铁试剂显色。杜仲叶提取液中通常含有较多有色物质, 使得溶液颜色较深, 如不除去则为后续纯化操作带来麻烦。因此有必要对杜仲叶提取液进行脱色, 作者选择活性炭进行脱色研究。通常用于中药提取液脱色的是粉末状活性炭, 具有很强的吸附能力, 可以将溶液中的有色物质吸附在表面上, 从而达到脱色的目的。使用前活性炭需进行预处理, 将适量粉末状活性炭(100 ~ 120 目)于120 ℃下加热活化4 ~ 5 h , 以除去所吸附的气体。将杜仲叶提取物加入到化妆品中,即可制得杜仲叶提取物化妆品。
【原料配伍】杜仲叶提取物在化妆品中质量份配比范围是0.3~1,优选为0.4~0.8,最优选为0.5。
化妆品可选自美容霜、晚霜、眼霜、洗面奶、紧肤水、按摩膏、去皱精华素和面膜等。
【产品应用】杜仲叶提取物可添加到多种形式的化妆品中,用于护肤、去皱、抗衰老。
【产品特性】杜仲叶提取物能与各种化妆品很好地融为一体,工艺简单,成本较低;化妆品使用安全,效果显著。杜仲皮、叶水煎剂ip小鼠LD50分别为17.30±0.52g/kg,8.64±0.59g/kg。大鼠亚急性毒性表明,杜仲皮、叶水煎剂及皮、叶醇提取物1.75g/kg,3.5g/kg ig21d,未见明显毒性(肝、肾、白细胞数)[2]。豚鼠ip 10~15g/kg,3~5d内半数死亡[1]。犬ip 35%煎剂10 ml/d,42d后镜检对心,肝及脾组织无病变,仅肾小管上皮细胞有轻度变性,豚鼠及大鼠情况相同。性味归经 甘、微辛,温。归肝、肾经。
功能主治 补肝肾,强筋骨,安胎。主治腰膝酸软,足膝痿弱,小便余沥,阴下湿痒,胎漏欲下,高血压等。