健那绿 B

健那绿B（JanusgreenB）是专一性线粒体的活细胞染料，可使线粒体呈现蓝绿色，而细胞质接近无色，以在高倍显微镜下观察线粒体分布和形态.经过前期的文献查阅，发现关键中间体亚甲基紫3RAX的合成方法没有文献报道，且国内没有大规模生产，主要是依赖进口.有研究参考苯基吩嗪类化合物的合成方法，结合制药工艺路线设计中的模拟类推法，设计了健那绿B的全合成路线，成功地制备了健那绿B。健那绿B包含偶氮嗪发色团，作为一种有机染料可以用作结构的有效探针，生物大分子的功能探针和一些生物过程的研究模型.近年来，染料-蛋白质相互作用也引起了蛋白质化学和超分子化学极大的兴趣.此外，由于其本身带有正电荷，健那绿B在电镀材料方面也逐渐凸现它的应用价值。

1）亚甲基紫3RAX的制备：先将对苯二胺5g（46.3mmol）和N，N-二乙基苯胺6.9g（46.3mmol）溶于12mL6mol/L盐酸，滴入200mL醋酸-醋酸钠缓冲溶液（pH5.1）溶液，再加入重铬酸钾16.0g，20℃下，搅拌5h.随后加入苯胺4.3g（46.3mmol），升温至100℃，继续反应4h后，趁热过滤，用200mL水洗涤滤饼，合并滤液，减压浓缩至50mL，盐析，得到紫色粉末3.8g，纯度94.9%（HPLC）.收率29.9%，MS（ESI+）：343［M-Cl］+.

2）健那绿B的合成冰浴下，将亚甲基紫3RAX3g（7.9mmol）溶于20mL6mol/L盐酸中，缓慢滴加含有0.7g亚硝酸钠的10mL水溶液.待溶液由紫红色变为深蓝色后，继续搅拌1h.再加入N，N-二甲基苯胺1.0g（7.9mmol）继续反应8h.减压至干，残余物分散于饱和盐水中，过滤，滤饼干燥，得到暗绿色固体粉末3.3g，收率82.1%，纯度83.3%（HPLC）.MS（ESI+）：476［M-Cl］+.

棕色呈深棕色结晶性粉末。溶于水呈蓝色，微溶于醇。生化研究。用于线粒体活体染色，真菌和原虫染色，胚胎切片染色，以及用作氧化还原指示剂和铜的电镀添加剂由N，N-二乙基酚藏红色经重氮化后与N，N-二甲基苯胺偶合而得。