RT4细胞

细胞培养是当前细胞生物学乃至整个生命科学研究与生物工程中基本的实验技术。 动物细胞培养为疫苗生产、药物研制与肿瘤防治等医学实践提供了全新的手段。细胞培养包括原核生物细胞，入细菌;真核单细胞生物，入酵母菌、四膜虫等;植物细胞与动物细胞的培养以及于此密切相关的病毒的培养。

动物细胞培养
体外培养的细胞可分为原代细胞(primary culture cell)与传代细胞(subculture cell)。原代细胞是指机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养，适应在体外培养下条件下持续传代培养的细胞称为传代细胞。
分散的细胞悬液在培养瓶中很快(在几十分钟至数小时内)就贴附在瓶壁上，这就称为细胞贴壁。
分散呈圆球形的细胞一经贴壁就迅速铺展并开始有丝分裂，逐渐形成致密的细胞单层，称为单层细胞(sigle cell),这种培养方法称为单层细胞培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
如果漂浮的死细胞多，说明细胞有很多老化的，建议每次传代的时候，在用胰酶消化之前，用PBS将细胞漂洗一遍，胰酶消化的时间要把握好，37℃2-3min即可，及时终止反应，否则胰酶消化过度对细胞损伤较大，也会有很多死细胞出现的;吹打细胞的动作要轻柔。
体外培养的细胞，不论是元代细胞还是传代细胞一般不包吃体内原有的细胞形态。但大体可以分为两种基本形态：成纤维样细胞(fibroblast like cell)与上皮样细胞(epitbelial like cell)。此外还有一些可移动的游走细胞。
某些传代细胞还可用悬浮方法培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。