背景[1]
膀胱癌是泌尿科常见的恶性肿瘤之一，居中国男性泌尿生殖系恶性肿瘤发病率第1位，其病死率位居恶性肿瘤的第8位，且呈上升趋势。膀胱癌易复发、侵袭及转移，新诊断的膀胱癌患者中约5%的患者已发生远处转移。关于其侵袭和转移机制目前尚未明确。近年来，虽然在膀胱癌的临床诊断和治疗方面有所进展，但由于缺少理想的诊断和预后标志物，其预后仍不理想。为了研究膀胱癌的发生、侵袭、转移机制，一般选用人膀胱癌RT4细胞进行系列的科学研究。
RT4细胞的简介[1]
RT4细胞的组织来源是患有移行细胞乳头瘤的人膀胱器官。呈上皮细胞样，支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性，一般采用T25 瓶或者1mL冻存管包装。
培养步骤[1]
1、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2 培养瓶中的培养液，用PBS 清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml 离心管中，1000rpm 离心5min；
3）弃上清，沉淀细胞用1-2ml 完全培养基重悬，然后按1:2 比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养；
2、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2 培养瓶中的培养液，用PBS 清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml 离心管中，1000rpm 离心5min；
3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
3、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含6ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm 离心5min；
3）弃上清，沉淀用6ml 完全培养基重悬，接种25cm2 培养瓶，于37℃，5%CO2 细胞培养箱中培养。
主要参考文献
[1]张劲勍，赵晓昆；性激素对膀胱移行细胞癌细胞株RT4细胞生长的影响。《中华中医药学刊》。《第六次全国中西医结合泌尿外科学术会议暨第二届湖南省中西医结合泌尿外科学术会议论文汇编》2007年。