在我们溶解多肽的时候,经常会遇到一些疏水性序列,这就导致了多肽很难以我们想要的浓度溶解于水中,这个时候,我们可以考虑使用DMSO。
DMSO(二甲基亚砜)是一种含硫有机化合物,分子式为(CH3)2SO,常温下为无色无臭的透明液体。DMSO作为冷冻保护剂经常应用于细胞库。在细胞冷冻过程中,DMSO可防止胞内/胞外晶体的形成,其工作浓度为10%。DMSO通常可与盐或血清白蛋白结合。
疏水性多肽可以很容易地溶解在DMSO中。但DMSO可增加细胞的通透性,若多肽溶解于DMSO中则会对细胞产生毒性作用。高浓度的DMSO绝不可应用于细胞培养中。这个时候,我们可以考虑控制溶液中DMSO的溶度。通常,浓度为5%的DMSO即可让细胞膜溶解。大多数细胞株可以容忍0.5% DMSO,少许可以容忍1%的浓度,而不表现出严重的细胞毒性。然而原代细胞培养对其更敏感。所以如果是用原代细胞做剂量/反应曲线(可行性),其浓度应低于0.1%。
下面是我们对于细胞对DMSO毒性耐受性的一些经验:
• 对几乎所有的细胞来说,浓度为0.1%DMSO是安全的。
• 广泛被用于细胞培养的DMSO终浓度为0.5%,不会引起细胞毒性。
• 虽然对部份细胞来说,1%DMSO也不会产生细胞毒性,但我们推荐0.5%。
• 也有5%DMSO成功地应用于某些细胞的案例。
• 始终保持终浓度在0.5%,但储存时可200倍高浓度溶于100%的DMSO中。
对于某些疏水性非常高的多肽,可先尝试将其溶解在少量的DMSO(30-50ul,100%)中,然后慢慢 (一滴一滴地)将其添加到不断搅拌的水溶液如PBS或其他想要的缓冲液中,直至理想浓度。如果滴加过程中,肽溶液开始变浑浊,说明已经达到了溶解极限。另外,还可以尝试使用超声波帮助多肽溶解。