离子结合型果胶(ISP)含量试剂盒说明书
分光光度法 50管/24样
注 意 ：正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定
离子结合型果胶(ISP)含量试剂盒测定意义：
果胶是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分，主要由原果胶、果胶酸甲酯和果胶酸组成。果胶中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等，是许多高等植物细胞壁中含量最丰富的多糖成分，其独特的物理、化学性质影响着植物源食品的口感和品质。果胶间以Ca2+桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联，通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶，如水溶性果胶（WSP）、离子结合型果胶（ISP）和共价结合果胶（CSP）。
测定原理：
利用带有螯合剂的酸溶液提取离子结合型果胶（ISP），采用咔唑比色法测定果胶含量。果胶水解成半乳糖醛酸，在硫酸溶液中与咔唑试剂进行缩合反应，生成物质在530 nm处有吸收峰。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、80％乙醇、丙酮、浓硫酸（不允许快递）、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：液体50mL× 1瓶，4℃保存。
试剂二：液体50mL× 1瓶，4℃保存。
试剂三：标准液1mL× 1支，4℃保存。
试剂四：液体5 mL× 1瓶，4℃保存；
样品的前处理：
1、 细胞壁的提取：取约0.3g样本，加入1mL 80％乙醇，室温快速匀浆，95℃水浴20min，冷却至室温，4000g 25℃离心10min，弃上清。沉淀加入1.5mL80％乙醇和丙酮各洗一遍（涡旋振荡2min左右，4000g 25℃离心10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁，加入1mL试剂一（去除淀粉）浸泡15小时，4000g 25℃离心10min，弃上清，将沉淀干燥，称重得细胞壁物质（CWM）。
2、 ISP的提取：称取烘干的CWM 3mg，加入1mL试剂二，充分匀浆(若烘干物质质地坚硬，可先研碎后再加入1mL试剂二匀浆，或者用匀浆器匀浆)。8000g 4℃离心10min，取上清液待测。
离子结合型果胶(ISP)含量试剂盒测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至530nm处，蒸馏水调零；试剂三和试剂四37℃预热10min以上；
2、操作表：
试剂名称（µL） | 空白管 | 标准管 | 对照管 | 测定管 |
待测样本 |
|
| 100 | 100 |
试剂三 |
| 100 |
|
|
蒸馏水 | 100 |
| 100 |
|
试剂四 | 100 | 100 |
| 100 |
混匀
混匀95℃水浴5min后，530nm处读取吸光值，空白管、标准管、对照管和测定管吸光值分别记为A1、A2、A3和A4。若A大于2，需将待测样本用蒸馏水稀释（可稀释10倍或20倍）。空白管和标准管只要做一管，每个测定管需设一个对照管。
ISP含量计算：
ISP含量(mg /g 干重)= (C标准×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀释倍数=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀释倍数
C标准：标准管浓度，0.05mg/mL；V1：加入样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，1mL； W：样本干重，g。
注意：
最低检测限为50μg /g 干重
关键字： 离子结合型果胶(ISP)含量试剂盒;离子结合型果胶(ISP)含量试剂盒;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科学领域，提供科研类试剂、耗材、仪器、技术服务的生物企业。包括分子生物学、免疫学、微生物学、细胞学等 。旗下拥有 “雅吉生物”、“晶风生物”、“彩佑实业”、“GTX” 品牌。通过公司各部门员工的共同努力在行业内拥有较高知名度，深得新老客户厚爱，本着“优质、服务、信誉”的精神，坚持以优良的技术、优质的产品、良好的信誉为国内外广大用户提供优质生物产品和服务。
公司在重视产品质量的同时，也建立了一套集技术支持，物流售后服务等多部门联动服务体系，努力把我们方便、快捷、周到的服务提供给每一个客户，雅吉生物的试剂盒，在国内众多重点实验室广泛使用，深受广大科研人员好评，先后在权威杂志文章中被引用。
本公司郑重承诺：质量保证、供货及时、服务周到。