可溶性果胶(WSP)含量试剂盒说明书
分光光度法 50管/24样
注 意 :正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定
可溶性果胶(WSP)含量试剂盒测定意义:
果胶是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分,主要由原果胶、果胶酸甲酯和果胶酸组成。果胶中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等,是许多高等植物细胞壁中含量最丰富的多糖成分,其独特的物理、化学性质影响着植物源食品的口感和品质。果胶间以Ca2+桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联,通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶,如水溶性果胶(WSP)、离子结合型果胶(ISP)和共价结合果胶(CSP)。
测定原理:
利用酸溶液提取得到(WSP)可溶性果胶,采用咔唑比色法测定果胶含量。果胶水解成半乳糖醛酸,在硫酸溶液中与咔唑试剂进行缩合反应,生成物质在530 nm处有吸收峰。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、80%乙醇、丙酮、浓硫酸(不允许快递)、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体50mL× 1瓶,4℃保存。
试剂二:液体50mL× 1瓶,4℃保存。
试剂三:标准液1mL× 1支,4℃保存。
试剂四:液体5 mL× 1瓶,4℃保存;
样品的前处理:
1、 细胞壁的提取:取约0.3g样本,加入1mL 80%乙醇,室温快速匀浆,95℃水浴20min,冷却至室温,4000g 25℃离心10min,弃上清。沉淀加入1.5mL80%乙醇和丙酮各洗一遍(涡旋振荡2min左右,4000g 25℃离心10min,弃上清即可),沉淀即为粗细胞壁,加入1mL试剂一(去除淀粉)浸泡15小时,4000g 25℃离心10min,弃上清,将沉淀干燥,称重得细胞壁物质(CWM)。
2、 WSP的提取:称取烘干的CWM 3mg,加入1mL试剂二,充分匀浆(若烘干物质质地坚硬,可先研碎后再加入1mL试剂二匀浆,或者用匀浆器匀浆)。8000g 4℃离心10min,取上清液待测。
可溶性果胶(WSP)含量试剂盒测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至530nm处,蒸馏水调零;试剂三和试剂四37℃预热10min以上;
2、操作表:
试剂名称(µL) | 空白管 | 标准管 | 对照管 | 测定管 |
待测样本 |
|
| 100 | 100 |
试剂三 |
| 100 |
|
|
蒸馏水 | 100 |
| 100 |
|
试剂四 | 100 | 100 |
| 100 |
混匀
混匀95℃水浴5min后,530nm处读取吸光值,空白管、标准管、对照管和测定管吸光值分别记为A1、A2、A3和A4。若A大于2,需将待测样本用蒸馏水稀释(可稀释10倍或20倍)。空白管和标准管只要做一管,每个测定管需设一个对照管。
WSP含量计算:
WSP含量(mg /g 干重)= (C标准×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀释倍数=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀释倍数
C标准:标准管浓度,0.05mg/mL;V1:加入样本体积,0.1mL;V2:加入提取液体积,1mL; W:样本干重,g。
注意:
最低检测限为50μg /g 干重
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