原果胶含量试剂盒说明书
分光光度法 50管/ 24样
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
果胶是植物细胞壁主要组成成分之一,分为水溶性果胶和不溶性果胶,即原果胶。因其具有良好的乳化、增稠和凝胶作用,在食品、纺织、印染、烟草、冶金等领域具有较广泛的应用。
测定原理:
原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶,并进一步转化为半乳糖醛酸,产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物,在530 nm处有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品:
天平、研钵、常温离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL玻璃比色皿、浓硫酸和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液一:液体100mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液体50mL×1瓶,4℃保存。
标准品:液体1mL×1支,4℃保存。
试剂一:浓硫酸,自备。
试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体5mL×1瓶,4℃避光保存。
样品处理 :
将组织样品捣碎,按照样品质量(g)和提取液一体积(mL)为1: 20的比列(建议取约0.05g样品,加入1mL提取液一),置于90℃恒温水浴锅中浸提30min,取出冷却后于5000g、 25℃离心10min,去掉上清,沉淀中再加入1mL提取液一重复操作一次,离心后去上清,沉淀中加入1mL提取液二,置于90℃恒温水浴锅中水解1h,取出冷却后于8000g、25℃离心15min,取上清液待测。
测定操作表:
| 空白管 | 标准管 | 对照管 | 测定管 |
样本(μL) |
|
| 100 | 100 |
标准品(μL) |
| 100 |
|
|
浓硫酸(μL) | 600 | 600 | 600 | 600 |
混匀、90℃放置10min,取出后冷却 |
试剂二(μL) |
|
| 100 |
|
试剂三(μL) | 100 | 100 |
| 100 |
混匀,25℃静置30min |
蒸馏水(μL) | 300 | 200 | 200 | 200 |
充分混匀,置于1mL玻璃比色皿中,测定530nm处吸光值,分别记为A1、A2、A3和A4。 △A1=A2-A1,△A2=A4-A3 |
注意:空白管和标准管只需测定一次。
计算公式:
原果胶含量(mg /g 鲜重)= (C标准×V标) ×△A2÷△A1÷(W÷V样总) =0.25×△A2÷△A1÷W
C标准:标准品浓度,0.25mg/mL;V标:反应体系中加入标准品体积,0.1mL; V样总:加入提取液体积,1mL; W:样本鲜重,g。
注意事项:
1. 浓硫酸具有强腐蚀性,操作时需特别注意,90℃加热取出后冷却再打开盖子,以防液体飞溅烧伤。
2. 若吸光值超过1,可将样本提取液进行适当稀释再进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。
3. 最低检出限为10μg/g。
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