人多能干细胞消化液
一、产品基本信息
产品名称 | Applied Cell®人多能干细胞消化液 |
货 号 | AC-1001008 |
规 格 | 100mL |
运输保存条件 | 2-8℃,冰袋运输 |
使用范围 | 人多能干细胞(ES/iPS)消化后传代、冻存 |
保质期 | 12 个月 |
二、产品简介
人多能干细胞消化液是埃泽思生物科技有限公司(Applied Cell®)自主研发的一款不含蛋白消化酶、专业应用于人多能干细胞消化传代的产品。本产品为温和高效型消化液,限度减少对干细胞消化损伤,传代存活率高,且消化时间 3-5min 即可,和传统细胞传代方法相比,简化细胞传代过程。本产品生产过程遵循 ISO9001 体系,并符合 GMP 指导原则。
三、产品特性
l 温和高效,传代存活率高。
l 简化细胞传代过程,省去挑克隆的操作。
四、相关产品
人 多 能 干 细 胞 培 养 基 (Applied Cell®: Cat. no.AC-1001000) Advance 人多能干细胞培养基(Applied Cell®: Cat. no.AC-1001001) 人多能干细胞分化培养基(Applied Cell®: Cat. no.AC-1001002)
即 用 型 基 质 胶 (Applied Cell®: Cat. no.AC-1001007) ES/iPS 细胞冻存液(Applied Cell®: Cat. no.AC-1001012)
五、操作方法(此次操作以 6 孔板为例)
1) 清洗:准备预传代细胞,贴边缓慢加入预热 2 mL PBS 缓冲液并轻轻晃动,然后沿培养皿边缘吸去 PBS 缓冲液。
2) 消化:在 6 孔板中加入 2 mL 消化液使之覆盖皿底,并置于 CO2 培养箱中孵育 2~5 min;
注意:细胞密度不同,消化时间略有调整,在显微镜下观察到大部分克隆边缘以及克隆内部细胞间出
现间隙,即刻吸掉消化液停止消化。
3) 吹打:吸掉人多能干细胞消化液后,立刻加入平衡好的 2mL 干细胞培养基,用移液枪呈扇形吹打 6 孔板底,吹吸次数保持在 3~5 次,使皿底贴附的干细胞集落脱落,轻柔缓慢吹吸混匀,制成干细胞悬液,并将其转移到 15mL 离心管中;
注意:吹打细胞要轻柔,吹打次数在 3~5 次为宜,尽量避免形成单细胞。如有少量细胞无法从皿底脱落,属于正常现象。如有大量细胞无法从皿底脱落,需延长消化时间。
4) 干细胞消化后,可以继续进行传代接种,也可以将干细胞进行冻存,步骤如下:
接种:1200 rpm/min 离心 3 min,弃上清,用室温平衡好的干细胞培养基缓吹打重悬细胞 5-10 次, 并转移至包被好的培养板中,每孔 2ml 培养基。接种后显微镜下观察干细胞密度以及细胞团块大小, 一般 4 个细胞以上的团块较合格,水平十字轻轻晃动 6 孔板,使细胞分布均匀。并置于 CO2 恒温培养箱培养,第 2 天观察细胞贴壁情况,每 24h 换液一次。
冻存:1200 rpm/min 离心 3 min,弃上清,加入 2mL ES/iPS 细胞冻存液(AC-1001012),重悬3~5 次后,将其加入到 2mL 冻存管中(注意:冻存液即用即拿,及时放回 4℃冰箱。)。在冻存管上标记冻存细胞种类、时间、操作者及细胞批次,冻存管置于-80℃冰箱过夜,24h 后将其转至于液氮中进行长期保存。
六、质量控制
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埃泽思生物总部位于上海,公司取名Applied Cell(应用细胞),是一家致力于为细胞治aize 疗、再生埃泽思生物总部位于上海,公司取名AppliedCell(应用细胞),是一家致力于为细胞治疗、再生医学提供核心原料,以及研发服务(CRO )和生物药委托开发生产服务(CDMO)的生物科技公司。目前公司产品已经涵盖干细胞、免疫细胞治疗全流程试剂原料。其中核心产品已经完成美国FDADMF备案以及国家药品评审中心(CDE)药物原辅料备案,是国内资质最为齐全的细胞治疗原料供应商之一。目前,公司已与国内6家细胞治疗企业进行细胞治疗一类新药联合申报,一项日本一类新药联合申报。