产品描述
Hieff NGS® UltimaTM DNA Ligation Module是针对Illumina®高通量测序平台文库构建专业设计的DNA连接模块，其中的亮点为本产品采用一款我公司自主研发的高效连接酶Fast T4 DNA ligase。本产品可在双链平末端DNA片段或双链3´-dA DNA片段的两端连接Illumina®测序平台适用的DNA接头，具有连接效率高、简便、可实现自动化等优势。本产品已与Hieff NGS® UltimaTM Endperp Mix（Cat#12605），2×Super Canace® II High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12621）共同用于DNA文库构建，通过Illumina®高通量平台测序验证其有效性。本产品中提供的所有试剂组分，都经过严格的质量与功能验证，最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。
质量控制
Fast T4 DNA Ligase
1. SDS-PAGE纯度：>95%。
2. 16小时孵育检测：50 μL反应体系中包含5μl本酶和1 μg HindIII-λDNA，37°C下孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测，条带无降解；50 μL反应体系中包含5μl本酶和1 μg T3 DNA，37°C下孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测，条带无降解。
3. RNase活性：5 μl本酶中加入40 ng FAM-RNA及，37°C下孵育16小时。经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，条带无降解。
4. 核酸内切酶活性：50 μL反应体系中加入5 μl本酶和1 μg φX174 RF I DNA，37°C下孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测，RF II转化比率<10%。
5. 核酸外切酶活性：50 μL反应体系中加入至少5 μl本酶和1 μg声振的[3H]DNA（105 cpm/μg），37°C下孵育4小时，释放的放射性<0.1%。
6. 功能活性（平末端连接）：50 μL反应体系，在1×Fast Ligation Buffer中，加入0.5 µL Fast T4 DNA Ligase，18 μgHaeIII φX174，16°C孵育7.5分钟。经琼脂糖电泳检测，片段连接率>95%。
7. 功能活性（接头连接）：50 μL反应体系，在1×Fast Ligation Buffer中，加入0.125 µL Fast T4 DNA Ligase，8 nmol12 bp接头，16°C孵育过夜。经琼脂糖电泳检测，无明显未连接接头。
Fast Ligation Buffer
1. 16小时孵育检测：50 μL反应体系中包含1×Fast Ligation Buffer和1 μg HindIII-λDNA，37°C下孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测，条带无降解；50 μL反应体系中包含1×Fast Ligation Buffer和1 μg T3 DNA，37°C下孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测，条带无降解。
2. 核酸内切酶活性：50 μL反应体系中包含1×Fast Ligation Buffer和1 μg φX174 RF I DNA，37°C下孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测，RF II转化比率<10%。
3. RNase活性：在1×Fast Ligation Buffer中加入40 ng FAM-RNA，37°C下孵育16小时。经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，条带无降解。
4. 磷酸酶活性检测：在磷酸酶活性检测缓冲液中加入1×Fast Ligation Buffer和2.5 mM对硝基苯磷酸，37°C下孵育4小时。经光谱测定法检测，405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰。
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上海翊圣生物科技有限公司（Yeasen Biotech Co., Ltd.）成立于2009年，是专注于酶制剂和抗原抗体开发的高新技术型企业，致力于为生命科学研究领域内的科研客户及精准医疗相关行业的工业客户提供高质量的产品和优质的服务。
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