背景[1-3]
牛肉碱棕榈酰转移酶-Ⅰ(CPT1)ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被牛肉碱棕榈酰转移酶Ⅰ(CPT-Ⅰ)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的牛肉碱棕榈酰转移酶Ⅰ(CPT-Ⅰ)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
牛肉碱棕榈酰转移酶Ⅰ(CPT-Ⅰ)酶联免疫分析试剂盒操作流程
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于CPT1基因对猪脂肪沉积的影响及其调控机制的研究
脂肪酸β-氧化关键酶肉碱棕榈酰转移酶1(CPT1)在金华猪和长白猪不同组织中的表达特异性、不同生长阶段的表达规律及品种间的差异,研究CPT1基因表达在脂肪沉积中的作用,及其与体脂和肌内脂肪沉积的关系。
通过猪肌内前体脂肪细胞体外培养模型的建立,利用CB1激动剂△9-四氢大麻酚(△9-THC)和抑制剂利莫那班(SR141716)探讨大麻素1型受体(CB1)基因对CPT1调控的分子机制。主要研究结果如下：金华猪、长白猪胴体性状及肉质性状的比较研究结果表明,180日龄金华猪瘦肉率和眼肌面积均显著小于同日龄的长白猪(p<0.01);金华猪肌内脂肪含量显著高于长白猪(p<0.01),金华猪背膘厚、脂肪率和皮脂率均显著高于长白猪(p<0.01);金华猪压出水比显著低于长白猪(p<0.01)；
金华猪滴水损失低于长白猪,但差异不显著(p>0.05);金华猪和长白猪宰后45min肌肉pH值差异不显著(p>0.05),且均在正常范围内；肉色中金华猪L值显著高于长白猪(p<0.01),两猪种a值和b值差异不显著(p>0.05)。试验表明,金华猪和长白猪在胴体品质和肉质上存在显著差异,在肉质上,金华猪肉质优于长白猪。
猪CPTl基因表达的组织特异性、表达规律及品种差异研究CPT1基因的两种亚型L-CPT1和M-CPT1在猪的不同组织均有广泛的表达。L-CPT1 mRNA在肝脏、胰脏和十二指肠中表达量较高,在背最长肌、皮脂、脾和脑中表达量较低。M-CPT1 mRNA在背最长肌和皮脂中表达量较高,在肾脏、脾脏、脑、肺和十二指肠中表达量较低。在不同生长阶段的金华猪和长白猪上,L-CPT1和M-CPT1具有相似的表达规律,两基因的mRNA表达量都呈现先上升后下降的趋势,在30日龄时表达量达到最高。
M-品种差异性比较研究的结果表明,在背最长肌中,金华猪的CPT1 mRNA表达量和蛋白表达量均显著高于长白猪(p<0.01),且与肌内脂肪含量呈正相关；在皮下脂肪和腹脂中,金华猪的CPT1 mRNA表达量和蛋白表达量均显著低于长白猪(p<0.01),且与体脂肪率呈负相关。
参考文献
[1]Ontogeny of adipokine expression in neonatal pig adipose tissue[J].T.G.Ramsay,T.J.Caperna.Comparative Biochemistry and Physiology,Part B.2008(1)
[2]Differential leptin access into the brain—A hierarchical organization of hypothalamic leptin target sites?[J].Heike Münzberg.Physiology&Behavior.2008(5)
[3]Adipose triglyceride lipase(ATGL)expression in human skeletal muscle is type I(oxidative)fiber specific[J].Johan W.E.Jocken,Egbert Smit,Gijs H.Goossens,Yvonne P.G.Essers,Marleen A.Baak,Marco Mensink,Wim H.M.Saris,Ellen E.Blaak.Histochemistry and Cell Biology.2008(4)
[4]The Endogenous Cannabinoid System Stimulates Glucose Uptake in Human Fat Cells via Phosphatidylinositol 3-Kinase and Calcium-Dependent Mechanisms[J].Claudio Pagano,Catia Pilon,Alessandra Calcagno,Riccardo Urbanet,Marco Rossato,Gabriella Milan,Katiuscia Bianchi,Rosario Rizzuto,Paolo Bernante,Giovanni Federspil,Roberto Vettor.The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism.2007(12)
[5]张艳芳.CPT1基因对猪脂肪沉积的影响及其调控机制的研究[D].浙江大学,2010.