背景[1-3]
改良CCDA培养基基础添加剂是含有头孢菌素钠、利福平和两性霉素B的CCDA培养基，用于弯曲菌选择性分离，每100ml培养基中添加1支改良CCDA培养基基础添加剂。
无血弯曲菌琼脂（Campylobacter Agar,blood-free）简称CCDA，是选择性固体培养基，用于从食品、临床样本中分离弯曲菌。该培养基支持绝大多数肠道弯曲菌的生长。
弯曲菌是微需氧型、很小（直径1.5-5微米）、弯曲的革兰氏阴性杆菌。弯曲菌是肠道疾病的主要病原菌。这些病原菌可以通过食物和水传染和传播。
蛋白胨、酪蛋白盐酸盐和牛肉浸粉提供弯曲菌生长必需的营养成分。酪蛋白帮助耐萘啶酮酸的嗜热弯曲菌生长。无血弯曲菌琼脂含有硫酸铁、丙酸钠和活性炭，能够缓解代谢产生的过氧化物等毒素，有助于对氧气敏感的弯曲菌生长。
活性炭替代血液。脱氧胆酸钠部分或弯曲抑制革兰氏阳性菌、大肠菌群和变形杆菌的生长。通过加入弯曲菌补充剂，头孢哌酮钠提高培养基选择性，抑制革兰氏阴性肠杆菌和一些革兰氏阳性菌生长。而两性霉素B阻止酵母菌和真菌的生长。
配制方法：
1.称取45.5g本产品，加1000ml去离子水，加热使其溶解。
2.121°C灭菌15min。
3.冷却至45-50°C时加入0.5ml两性霉素B和1.6ml头孢哌酮钠。混匀后倒平板。
应用[4][5]
用于弯曲菌real-time PCR技术的建立及多种定量检测方法的比较研究
弯曲菌real-time PCR定量检测方法的建立以弯曲菌16s rRNA基因作为靶基因,建立检测弯曲菌的real-time PCR方法。
弯曲菌标准株、分离株均扩增出曲线,而其他常见食源性病原菌均无扩增,表明该方法具有较强的特异性。
敏感性试验结果显示,该方法对弯曲菌检测限在10CFU/mL左右。荧光定量PCR方法标准曲线循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系,标准曲线为：y=-3.286x+40.878,R2值达到0.999,批内可重复变异系数在0.12%-0.4%之间,批间可重复变异系数为0.17%,重复性好。
对样品分别使用样品直接热裂解法、菌液浓缩热裂解法和基因组试剂盒提取法提取模板DNA,并对不同制备方法的荧光定量PCR结果进行了比较,最终选用菌液浓缩热裂解法提取鸡肉擦拭样品和鸡肛拭样品模板DNA,弯曲菌DNA回收率分别为46%和19.6%,选用基因组试剂盒提取鸡肉淋洗样品模板DNA,该方法的DNA回收率为1.2%。
2选择性CCDA平板菌落计数法和选择性Karmali平板菌落计数法的优化本研究参照翟伟华等建立的禽肉中弯曲菌定量检测方法,对选择性CCDA平板中抗生素进行浓度调整,并比较添加三种不同抗生素浓度的平板对实际样品中弯曲菌检测的影响。
结果表明：甲氧苄氨嘧啶、利福平和放线菌酮三种抗生素浓度调整为0.01g/L、0.01g/L和0.1g/L时,更有利于弯曲菌的生长,且平板上杂菌的量也不影响对弯曲菌可疑菌落的判定,采用该浓度抗生素平板与纯培养弯曲菌的符合度为(95+5)%。选择性Karmali平板菌落计数法参照《我国零售鸡肉中弯曲菌污染对人群健康影响的初步定量风险评估项目》中所采用的定量分离样品中弯曲菌方法,通过实际样品检测以验证其有效性。
参考文献
[1]Characteristics and comparative performance of direct culture,direct PCR and enumeration methods for detection and quantification of Campylobacter spp.in broiler caeca[J].J.D.Rodgers,J.R.Lawes,A.B.Vidal,J.Ellis-Iversen,A.Ridley,E.J.Pleydell,L.F.Powell,M.Toszeghy,K.Stapleton,F.A.Clifton-Hadley.Veterinary Microbiology.2012(3-4)
[2]Reverse transcriptase real-time PCR for detection and quantification of viable Campylobacter jejuni directly from poultry faecal samples[J].Xuan Thanh Bui,Anders Wolff,Mogens Madsen,Dang Duong Bang.Research in Microbiology.2011(1)
[3]Evaluation of ISO 10272:2006 standard versus alternative enrichment and plating combinations for enumeration and detection of Campylobacter in chicken meat[J].Ihab Habib,Mieke Uyttendaele,Lieven De Zutter.Food Microbiology.2011(6)
[4]Quantification of Campylobacter spp.in pig feces by direct real-time PCR with an internal control of extraction and amplification[J].Journal of Microbiological Methods.2011(1)
[5]朱佳琪.弯曲菌real-time PCR技术的建立及多种定量检测方法的比较[D].扬州大学,2013.