背景[1-3]
麦康凯琼脂培养基(MACC)用于粪便、分泌物中肠道致病菌及肠球菌的分离培养。主要成分：蛋白胨、脙胨、猪胆盐(或牛、羊胆盐)氯化钠、琼脂、乳糖、1%结晶紫水溶液、0.5%中性红水溶液。
麦康凯平板的原理：利用胆盐来抑制革兰阳性细菌的生长,而对伤寒等沙门菌有促进生长的作用。利用乳糖发酵,中性红的颜色可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌区别开。沙门菌及志贺菌呈无色菌落,大肠埃希菌呈桃红色菌落。
麦康凯琼脂培养基（MacC）使用步骤：
（一）准确称量试剂：根据不同的菌类和用途，选择适宜的培养基，培养基所需试剂必须纯净。
（二）校正pH值：将称量好的培养基各种成分放入容器内，标记划线，加热溶解，补充水分，测定酸碱度，常用pH6.8～8.0的试纸或酸度计测定。用1N NaOH和1N HCl调节pH值到适宜范围内。
（三）过滤：将玻璃漏斗置铁架上，再用纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中，将上述培养基倒入其中过滤至透明。
（四）分装：将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内（试管内每支装5mL；三角瓶中装100～150ml），塞好棉塞用牛皮纸包扎好，准备灭菌。
（五）灭菌：培养基的灭菌，常用高压蒸汽灭菌法。一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死，但细菌的芽胞有较强的抗热性，须经高压蒸汽灭菌才能达到彻底灭菌的目的。
应用[4][5]
用于鸭源巴氏杆菌与鸭源沙门氏菌融合菌株的制备及鉴定研究
利用了亲本菌株在培养特性及耐药性两方面存在的差异,标记亲本菌株对融合菌株进行筛选。
通过药敏纸片试验和最低抑菌浓度试验(MIC)筛选出两亲本菌株鸭源沙门氏菌(S6)和鸭源巴氏杆菌(CBa),确定亲本菌株药物标记,药敏试验结果表明鸭源沙门氏菌(S6)对壮观霉素敏感,抑菌圈为26 mm,鸭源巴氏杆菌(CBa)对壮观霉素耐药,抑菌圈为0mm。通过测定最低抑菌浓度(MIC),确定32μg/ml的壮观霉素作为选择培养基的抗生素浓度。
壮观霉素应用浓度试验结果表明,在含32μg/ml壮观霉素的麦康凯培养基中S6完全不能生长,在含32μg/ml的新霉素的血琼脂培养基中CBa能良好生长。
筛选出的亲本菌株通过紫外分光光度计测量OD600值绘制CBa和S6的生长曲线,确定原生质体制备时间：CBa为12-14 h,S6为14-16 h。
在溶菌酶的作用下制备原生质体,确定制备CBa原生质体的溶菌酶浓度为3 g/L,可得到95.25%的原生质体制备率以及33.52%的再生率；制备S6原生质体的溶菌酶浓度为2.5g/L,可得到95.32%的原生质体制备率以及32.19%的再生率。
通过聚乙二醇(PEG)法进行原生质体融合,利用抗药性结合培养条件对融合子进行筛选,再对融合菌株进行培养特性、菌落形态、菌体形态、血清学试验、稳定性检测等初步鉴定最终得到5株能够在32μg/ml壮观霉素的麦康凯平板上稳定遗传的融合菌株。
所得融合子进行血清学试验均能凝集双亲菌株阳性血清,菌体形态为中等大小两端顿圆的革兰氏阴性杆菌,能够在麦康凯培养基长出圆形淡黄色菌落,生化试验结果表明氧化酶为阳性,吲哚、枸橼酸钠、蔗糖、乳糖、侧金盏花、硫化氢、氰化钾均为阴性。
参考文献
[1]Protoplast fusion—a tool for genetic manipulation and breeding in industrial microorganisms.John F.Peberdy.Enzyme and Microbial Technology.1980
[2]Plasmid transfer and genetic recombination by protoplast fusion in staphylococci.Gtz F,AhrnéS,Lindberg M.Journal of Bacteriology.1981
[3]Genome shuffling:A new trend in improved bacterial production of lactic acid.John,Rojan P,Anisha,G.S,Pandey,Ashok,Nampoothiri,K.Madhavan.Industrial Biotechnology.2010
[4]Protoplast Formation and Regeneration of Rhodococcus sp.BX2.Liping Feng,Chunyan Li,Chunhong Xu,et al.Journal of Information Technology.2012
[5]谭天.鸭源巴氏杆菌与鸭源沙门氏菌融合菌株的制备及鉴定[D].四川农业大学,2015.