背景[1-3]
胎牛血清(GIBCO原装,产地澳洲)是Gibco原装进口产品,产地澳洲。胎牛血清为纯天然制品,不含任何人为的添加成分,可应用于各种常规的细胞培养,特别适合于一些要求较高的细胞的培养,为细胞提供必须的营养物质和多种生长因子,有效促进细胞生长。
Gibco是世界著名动物血清品牌,所有血源都是由美国农业部和欧盟所认证的无疯牛病区域的屠宰场所提供。
胎牛血清是一种性状、外观浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。
显然,胎牛血清是品质最高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。
血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。
胎牛血清从血液收集到最终产品检验和审核的每一个步骤,都采用专用设备和标准操作程序,保证高品质和各批次的一致性。所有操作符合GMP(Good Manufacturing Practices for Drug)标准。无细菌、真菌、支原体及病毒污染,具有高质量和高稳定性。
应用[4][5]
用于不同浓度胎牛血清培养下骨髓间充质干细胞诱导为心肌样细胞的比较研究
研究不同浓度胎牛血清培养下骨髓间充质干细胞的一般特性如形态、核型、增殖动力学、表型特点和分化成心肌样细胞潜能等生物学性状,并在低血清浓度下培养诱导后的心肌样细胞,并观察心肌样细胞增殖和特异性蛋白的表达情况。
方法:采用全骨髓贴壁的培养方法获取大鼠的骨髓间充质干细胞(BMSCs)。在细胞传到第2代时,分为5个组,加入含有不同浓度胎牛血清(FBS)的L-DMEM培养基,FBS浓度分别为0%,2.5%,5%,7.5%,10%,并以浓度系数标记各组。
取第4代BMSCs,利用MTT法在(1、3、5、7、9d)检测细胞的增殖。分别取各组传代到第4代BMCS,加入Ang II和5-Aza(Ang II 0.1μmol/l和5-Aza 10μmol/l)诱导剂诱导,24h后吸弃含有诱导剂的培养液,跟换新培养液继续培养。
取诱导后各组的第1代(y P1)细胞,使用MTT法检测类心肌细胞在(1、3、5、7d)的生长活力,细胞免疫荧光化学染色法检测诱导后培养至第4周时各组中c Tn I,Cx-43两类心肌相关蛋白的表达情况,并计算其表达率。
结果:1.在5种不同浓度FBS下的L-DMEM培养液均可获得第4代BMSCs;MTT检测细胞活力(1、3、5、7、9d)结果显示,5组不同体积分数的FBS培养液均可以促进BMSCs的生长,10%组>2.5%,5%,7.5%组>0%组,差异有统计学意义(p<0.05),2.5%,5%,7.5%组组间比较,差异无统计学意义(p>0.05)。
2.各组BMSCs在AngⅡ和5-Aza(AngⅡ0.1μmol/L、5-Aza 10μmol/L)联合作用诱导时,能分化为类心肌样细胞。诱导后的细胞MTT检测细胞活力显示10%组>7.5%>5%,2.5%组>0%组(p<0.05),而5%,2.5%组比较未见明显差异(p>0.05)。各组心肌样细胞的蛋白的表达显示10%组>7.5%>5%,2.5%组>0%组差别有统计学意义(p<0.05),而5%,2.5%组比较未见明显差异,差异无统计学意义(p>0.05)。
参考文献
[1]The role of PKCε-dependent signaling for cardiac differentiation[J].D.Galli,G.Gobbi,C.Carrubbi,D.Marcantonio,L.Benedetti,M.G.C.De Angelis,T.Meschi,M.Vaccarezza,M.Sampaolesi,P.Mirandola,M.Vitale.Histochemistry and Cell Biology.2013(1)
[2]Embryonic Stem Cell Marker Expression Pattern in Human Mesenchymal Stem Cells Derived from Bone Marrow,Adipose Tissue,Heart and Dermis[J].Una Riekstina,Inese Cakstina,Vadims Parfejevs,Martin Hoogduijn,Georgs Jankovskis,Indrikis Muiznieks,Ruta Muceniece,Janis Ancans.Stem Cell Reviews and Reports.2009(4)
[3]Characterization of human skin-derived mesenchymal stem cell proliferation rate in different growth conditions[J].Una Riekstina,Ruta Muceniece,Inese Cakstina,Indrikis Muiznieks,Janis Ancans.Cytotechnology.2008(3)
[4]Concise Review:Mesenchymal Stem/Multipotent Stromal Cells:The State of Transdifferentiation and Modes of Tissue Repair—Current Views[J].Donald G.Phinney,Darwin J.Prockop.STEM CELLS.2009(11)
[5]孙国栋.不同浓度胎牛血清培养下骨髓间充质干细胞诱导为心肌样细胞的比较[D].山西医科大学,2015.