背景[1-3]
人17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA KIT用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人17-羟皮质类固醇(17-OHCS)的含量。
人17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人17-羟皮质类固醇(17-OHCS)水平。用纯化的人17-羟皮质类固醇(17-OHCS)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入17-羟皮质类固醇(17-OHCS),再与HRP标记的17-OHCS抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的17-羟皮质类固醇(17-OHCS)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人17-羟皮质类固醇(17-OHCS)浓度。
操作步骤
1。从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2。设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3。样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4。除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5。弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6。每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7。每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于若干同证疾病(伴或不伴抑郁)部分炎症及HPA轴相关指标的对照研究
选取年龄18-65岁,性别不限,现代医学诊断为BA.COPD和NSCLC的患者;选取中医辨证为肾阳虚证及非肾阳虚证并进行抑郁分型;
另选取年龄、性别匹配,无呼吸系统疾病的健康人群和单纯抑郁症人群作为对照组。同时排除合并肺部其他疾病的患者;一个月内使用糖皮质激素治疗的患者;一个月内接受手术或放化疗等治疗的患者。
在固定时间点采集所有研究对象外周血、诱导痰、唾液、24h尿液,用酶联免疫法(Enzyme-labeled immunosorbent assay,ELISA)和Bio-Plex悬液芯片检测痰上清液和血清中C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、总IgE(Total immunoglobulin E,tIgE)、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(Eosinophil cationic protein,ECP)、白介素(Interleukin,IL-6、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF-α)、转化生长因子(Transforming growth factor,TGF-β)、干扰素(Interferon,IFN)-γ水平等,观察患者炎症指标变化情况;同时用放免法检测血及唾液皮质醇、促肾上腺皮质激素(Adrenocorticoticotropic hormone,ACTH)、促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotrophin-releasing hormone,CRH);用放免法检测24h尿游离皮质醇(urinary free cortisol,UFC)、24h尿17-羟皮质类固醇(尿17-羟)、尿17-酮类固醇(尿17-酮)等指标,评估HPA轴功能水平。
参考文献
[1]The eosinophil and airway remodelling in asthma[J].PerVenge.The Clinical Respiratory Journal.2010
[2]Anti-inflammatory effect of leaves of Eriobotrya japonica correlating with attenuation of p38 MAPK,ERK,and NF-κB activation in mast cells[J].Sang-Hyun Kim,Tae-Yong Shin.Toxicology in Vitro.2009(7)
[3]The cytokine network in asthma and chronic obstructive pulmonary disease[J].Barnes,Peter J.Journal of Clinical Investigation.2008(11)
[4]Regulatory T Cells in Allergy and Asthma[J].Mark Larché.Chest.2007(3)
[5]杜懿杰.若干同证疾病(伴或不伴抑郁)部分炎症及HPA轴相关指标的对照研究[D].复旦大学,2012.