背景[1-3]
人白细胞介素17F(IL-17F)ELISA KIT盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。
将抗人IL-17F单克隆抗体包被在酶标板上;分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本,标准品和样本中的人IL-17F会与酶标板上的包被抗体充分结合;洗板后加入生物素化抗人IL-17F抗体,该抗体会与板子上包被抗体捕获的标准品和样本中的人IL-17F发生特异性结合;
洗板后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素,生物素与链霉亲和素会发生高强度的非共价结合;洗板后加入显色剂底物TMB,若反应孔中样品存在不同浓度的人IL-17F,则HRP会使无色TMB变成不同深浅(正相关)的蓝色物质,加入终止液后反应孔会变成黄色;
最后,在λmax=450 nm(OD=450 nm)处测定反应孔样品吸光度(OD),样本中的人IL-17F浓度与OD成正比,通过绘制标准曲线和四参数拟合软件便可计算出样本中人IL-17F的浓度。
ELISA KIT产品图
白细胞介素17F(IL-17F)和IL-17A是IL-17家族中紧密相关的两个成员,有大约50%氨基酸同源。IL-17F来源于不同细胞类型,如Th17细胞、肥大细胞和嗜碱性粒细胞,在组织中广泛表达,包括肺。
IL-17F可诱导支气管上皮细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞和嗜酸性粒细胞中的许多细胞因子、趋化因子和粘附分子。IL-17F利用IL-17RA和IL-17RC作为其受体,激活MAP激酶相关通路。
小鼠气道IL-17F基因的过表达与气道中的中性粒细胞增多、多种细胞因子的诱导、气道高反应性和粘液高分泌增加有关。因此,IL-17F在过敏性气道炎症中可能起到重要作用,对哮喘有重要的治疗意义。
应用[4][5]
用于雾化吸入灭活草分枝杆菌对哮喘小鼠模型白细胞介素-17F表达的影响研究
探讨雾化吸入灭活草分枝杆菌治疗哮喘小鼠模型中白细胞介素-17F(IL-17F)表达对气道炎症和气道高反应性(AHR)的影响。
方法将24只雄性BALB/c小鼠,采用数字随机表法分为3组,每组8只:分别为对照组、模型组、治疗组。建立鸡卵清蛋白(OVA)致敏的哮喘小鼠模型。在实验的第1、8、15天,予模型组和治疗组每只小鼠腹腔注射混合25μg OVA和1mg氢氧化铝粉的PBS悬浊液0.2ml致敏;
第22至28天,将OVA致敏的小鼠至于密闭雾化箱内,予2%的OVAPBS悬浊液经雾化器雾化吸入激发30min,每天1次。第29-33天,治疗组继续予灭活草分枝杆菌溶液雾化吸入干预30min。
对照组则予PBS替代OVA溶液腹腔注射及雾化吸入刺激。雾化过程中观察小鼠形态、活动变化等情况,每组均在最后一次雾化结束后立即行有创气道阻力检测;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),统计其炎症细胞数及细胞分类比例;
取肺组织行HE、过碘酸雪夫(PAS)染色,光镜下观察气道结构及病理改变,并行病理半定量评分,判断气道炎症严重程度;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测BALF和血清中IL-17F浓度;
采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的标准曲线法,测定小鼠肺组织中IL-17F表达变化情况。使用SPSS16.0统计软件进行统计学分析。
参考文献
[1]Effect of inhaled inactivated Mycobacterium phlei in children with moderate asthma[J].Moyu Ming,Chaoqian Li,Zhixi Luo,Shengqiu Lv.Immunotherapy.2013(2)
[2]Therapeutic effects of inhaled inactivated Mycobacterium phlei in adult patients with moderate persistent asthma[J].Jinghong Zhang,Sujuan Guo,Chaoqian Li,Xiaohong Jiang.Immunotherapy.2012(4)
[3]PS1-015.IL-17F,rather than IL-17A promotes CD4+T cell activation and Th1-type immunity[J].Ce Tang,Shigeru Kakuta,Motohiko Kadoki,Yoichiro Iwakura.Cytokine.2011(1)
[4]Remodeling in asthma[J].Saleh Al-Muhsen,Jill R.Johnson,Qutayba Hamid.The Journal of Allergy and Clinical Immunology.2011(3)
[5]罗智熹.雾化吸入灭活草分枝杆菌对哮喘小鼠模型白细胞介素-17F表达的影响[D].广西医科大学,2014.