背景[1-3]
人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的含量。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)水平。用纯化的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP),再与HRP标记的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA试剂盒
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)浓度。
操作方法:
1.标准品的加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.加酶:每孔加入酶标试剂100μl,空白孔除外。
4.温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
5.配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
6.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
7.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
8.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
9. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
应用[4][5]
用于癫痫患儿血清及脑脊液s-100β、胶质纤维酸性蛋白的变化及意义研究
通过观察癫痫患儿临床发作后血清及脑脊液中s-100β、GFAP的变化及二者相关性,以确定癫痫发作后是否引起脑损伤、脑损伤的程度并预测预后,并探讨星形胶质细胞在癫痫发作中的作用及意义。
方法1.癫痫患儿41例,其中全面性发作9例,部分性发作20例,婴儿痉挛症12例;对照组30例,为同期住院上呼吸道感染患儿,入院后经各项检查排除中枢神经系统(CNS)病变。两组患儿性别、年龄构成比差异无意义。
2.癫痫患儿在发作后24小时内,用药后4周、12周分别采取静脉血2ml,对照组患儿在入院后次晨采取静脉血2ml,均离心后取上清液,-80℃冰箱保存待检;婴儿痉挛症患儿入院签署腰穿知情同意书后24小时做腰椎穿刺检查,抽取脑脊液2ml,-80℃冰箱保存待检。
3.采用双抗体夹心酶联免疫吸附法,遵照试剂盒说明对标本进行检测。
4.用统计学分析软件包SPSS11.0对实验数据进行统计学分析,实验数据用均数加减标准差表示((?)±s),多样本均数间比较采用方差分析,两样本之间用t检验,两变量是否存在相关关系用等级相关分析,以α=0.05,p<0.05作为差别有显著意义的检验水准。
参考文献
[1]Astrocytic Response in Hippocampus and Cerebral Cortex in an Experimental Epilepsy Model[J].Elena Girardi,Alberto Javier Ramos,Gabriela Vanore,Alicia Brusco.Neurochemical Research.2004(2)
[2]Immunohistochemical investigations on the course of astroglial GFAP expression following human brain injury[J].R.Hausmann,R.Rie?,A.Fieguth,P.Betz.International Journal of Legal Medicine.2000(2)
[3]Kainic acid-induced activation of nuclear factor-κB in rat hippocampus[J].Yasuji Matsuoka,Yoshihisa Kitamura,Mitsuhiro Okazaki,Kazuhiro Terai,T.Taniguchi.Experimental Brain Research.1999(2)
[4]癫痫发作后患儿血清和脑脊液中神经元特异性烯醇化酶S-100β蛋白髓鞘碱性蛋白的变化[J].李光乾,林忠东,焦颖,施旭来,叶秀云,胡鸿文.中国当代儿科杂志.2004(06)
[5]丁瑛雪.癫痫患儿血清及脑脊液s-100β、胶质纤维酸性蛋白的变化及意义[D].郑州大学,2007.