背景[1-3]
人小肠粘膜上皮细胞完全培养基作为体外培养人小肠黏膜上皮细胞的培养基包含人小肠粘膜上皮细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于人小肠粘膜上皮细胞的体外培养。
人小肠粘膜上皮细胞
基础培养基添加血清、抗生素等物质后，叫完全培养基，也叫（血清）细胞培养基。基础培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需添加天然培养基，常用的是牛血清，因为牛血清中含有促细胞增殖的各种生长因子和其他多种有利于细胞生存的物质。此外为防止污染，培养液中尚需加一定量的抗生素。完全培养基根据添加血清量的多少，可分为细胞生长培养基和细胞维持培养基，用于不同细胞和不同研究。
上皮细胞覆盖于身体表面并衬贴于体内空腔器官腔面的细胞。其排列有明显极性，一面朝向身体表面或腔面，称游离面；一面向着深部的结缔组织，称基底面。上皮细胞具有强大的角生和更新能力。上皮组织具有保护、吸收、分泌和排泄等作用。当上皮细胞受损时，则影响机体的防御功能。小肠粘膜又分为粘膜上皮、固有膜和粘膜肌层3层组成，小肠粘膜系小肠壁的最内层结构。
应用[4][5]
用于肠上皮细胞谷氨酰胺载体B～0AT1/ASCT2的克隆表达及严重创伤后的功能调控研究
人类中性氨基酸载体B0AT1的真核表达重组质粒构建及稳定转染Hela细胞系的建立目的构建可表达人中性氨基酸载体B0AT1基因的真核表达载体,建立重组质粒转染的Hela细胞系,筛选出稳定表达人B0AT1的细胞株。
方法:提取人正常小肠上皮细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增出B0AT1基因片段,EcoRI和XbaI双酶切后将其插入至真核表达载体pcDNA3.1中,构建重组表达质粒pcDNA3.1-B0AT1,转化E.coli DH5α菌株感受态细胞,将阳性克隆脂质体法转染Hela细胞,经G418筛选获得稳定表达株,用RT-PCR法检测B0AT1基因的mRNA表达,氨基酸摄取实验证实转染pcDNA3.1-B0AT1的Hela细胞具有B0AT1基因的生物学活性。
结果:从小肠上皮细胞中成功克隆到人B0AT1基因,酶切和序列测定表明已成功构建真核表达载体pcDNA3.1-B0AT1,将此重组质粒转染的Hela细胞可稳定表达人B0AT1基因,并筛选出稳定表达B0AT1的Hela细胞系。
结论:重组人中性氨基酸载体B0AT1克隆成功,并在Hela细胞中获得稳定表达,为进一步研究B0AT1的功能及其调控干预打下了良好的基础第二部分Na+依赖性谷氨酰胺载体ASCT2的生物学功能及表皮生长因子的调控作用目的肠上皮细胞氨基酸载体对于机体营养物质吸收至关重要。
Na+依赖性中性氨基酸载体ASCT2是一种广谱的氨基酸载体,它的生理功能主要是转运肠腔内谷氨酰胺,丙氨酸,丝氨酸,半胱氨酸等中性氨基酸。
参考文献
[1]Phorbol Esters Rapidly Attenuate Glutamine Uptake and Growth in Human Colon Carcinoma Cells.Timothy M.Pawlik M.D.,MPH,Wiley W.Souba M.D.,Sc.D.,Thomas J.Sweeney M.D.and Barrie P.Bode Ph.D.Journal of Surgical Research.2000
[2]Functional regulation of Na+-dependent neutral amino acid transporter ASCT2 by S-nitrosothiols and nitric oxide in Caco-2 cells.Uchiyama T,Matsuda Y,Wada M,Takahashi S,Fujita T.FEBS Letters.2005
[3]Enterocyte nutrient transport is preserved in a rabbit model of acute intestinal ischemia.Iannoli P,Miller JH,Ryan CK,and Sax HC.Journal of Parenteral and Enteral Nutrition.1998
[4]The type of sodium-coupled solute modulates small bowel mucosal injury,transport function,and ATP after ischemia/reperfusion injury in rats.Kozar R.A,Schultz S.G,Hassoun H.T,et al.Gastroenterology.2002
[5]黄骞.肠上皮细胞谷氨酰胺载体B～0AT1/ASCT2的克隆表达及严重创伤后的功能调控研究[D].第二军医大学,2007.