背景[1-3]
人促甲状腺素释放激素(TRH)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人促甲状腺素释放激素(TRH)水平。
实验原理：用纯化的人促甲状腺素释放激素(TRH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入促甲状腺素释放激素(TRH)，再与HRP标记的促甲状腺素释放激素(TRH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的促甲状腺素释放激素(TRH)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人促甲状腺素释放激素(TRH)的浓度。
人促甲状腺素释放激素(TRH)ELISA试剂盒
操作步骤
1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9）在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于益气温阳补肾法对甲减大鼠TRH、TSH水平的影响研究
过实验研究，观察益气温阳补肾法对甲减大鼠甲状腺功能，下丘脑、血清TRH及垂体TSH水平的影响，并探讨其机理及其对下丘脑-垂体-甲状腺轴功能的调节，为中医药治疗甲减提供新思路，为临床研究提供新的实验资料。
方法:选取清洁级Wistar大鼠70只，随机分为5组，每组14只。即空白组、模型组、对照组（优甲乐组）、中药高剂量组、中药低剂量组。除空白组外，其余各组大鼠均予丙基硫氧嘧啶造模2周。成模后给予相应药物治疗，12周后，观察各组大鼠的症状及体征，检测下丘脑TRH，垂体TSH含量及血清中TRH、FT3、FT4、TSH分泌水平。
结果:1.造模后，各组大鼠血清FT3、FT4水平均显著低于空白组（P﹤0.01），TSH水平显著高于空白组（P﹤0.01），确定造模成功。
2. 给药前后观察甲减大鼠的症状及体征等一般状态变化，其中对照组、中药高低剂量组给药后均有不同程度好转，模型组无明显改善，且中药高剂量组与优甲乐组疗效相近。
3. 给药后，各治疗组血清FT3、FT4较给药前均有不同程度升高，模型组及空白组无明显变化，各给药组与模型组相比有统计学意义（P<0.01、P<0.05），中药高低剂量组与对照组相比无统计学意义（P>0.05），中药高低剂量组相比无统计学意义（P>0.05）。
4.给药后，各治疗组血清TSH较给药前均有不同程度降低，与模型组相比有统计学意义（P<0.01），中药高剂量组与对照组相比无统计学意义（P>0.05），中药低剂量组与对照组相比有统计学意义（P<0.05）。
参考文献
[1]Effects on bone mass of long-term treatmen with thyroid hormones:a meta-analysis.Uzzan B,Cmapos J,Cueherat M,et al.Clinics in Endocrinology and Metabolism.1996
[2]The expression of thyroid hormone receptors in human bone.Abu E O,Bord S,Horner A,et al.Bone.1997
[3]The isoform-specific expression of the tri-iodothyronine receptor in osteoblasts and osteoclasts.Allain TJ,Yen PM,Flanagan AM,et al.European Journal of Clinical Investigation.1996
[4]Neonantalscreeingforcongenitalhypothyroidism:resultsandPerspectives.FrancoisDelange.Hormone Research.1997
[5]侯凤艳.益气温阳补肾法对甲减大鼠TRH、TSH水平的影响[D].黑龙江省中医研究院,2012.