背景[1-3]
TC-1(小鼠肺上皮细胞)分离自小鼠肺组织，TC-1(小鼠肺上皮细胞)是肺细胞的主要类型之一，可用于分析肺上皮细胞对外界因素的反应。因此，小鼠肺部的TC-1可以作为疾病的体外模型。TC-1对于研究肺的发育、损伤和修复是必不可少的。从事呼吸系统疾病如急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、囊性纤维化、肺气肿和肺炎研究的人员通常依赖TC-1进行研究。
TC-1(小鼠肺上皮细胞)
TC-1很薄，是一种细长的鳞状细胞，主要帮助肺泡和血液之间的气体交换。体外原代培养的TC-1约18h已经贴壁生长。将细胞悬液接种入培养瓶中，置37，5%CO2培养箱内孵育45min，此时贴壁的细胞多为成纤维细胞，悬在培养液中的细胞多数为TC-1、部分成纤维细胞及其他杂细胞。
将培养液吸出接种于另一培养瓶中，同样继续37孵育40min，连续2~3次，最后吸出培养液，800r/min离心5min，去上清，用含10%胎牛血清的DMEM/F12重悬细胞沉淀，按密度为4x105个细胞／cm2接种于培养瓶中，37，5%CO2条件下培养24h后换液，去除未贴壁细胞继续培养3~6d，倒置显微镜观察细胞生长状态和形态特征。
培养48h细胞状态良好，可进行进一步的后续实验。培养36~48h，细胞平展呈多边形，逐渐融合，相互连接成细胞单层。培养大约72h后，细胞逐渐变得扁平，细胞内颗粒较前减少，有排空现象，胞质颜色变淡。
应用[4][5]
用于熊果酸诱导TC-1癌细胞自噬性死亡中线粒体相关机制的探讨研究
探讨线粒体在熊果酸诱导TC-1癌细胞自噬相关性死亡中的作用。
方法：利用细胞培养技术，熊果酸实验浓度分别为0μM、10μM、20μM、30μM，作用TC-1细胞24小时后，普通光镜下观察细胞数目及形态的变化；各种浓度熊果酸分别作用1、2、3、4、5天后，采用MTT法检测熊果酸对TC-1癌细胞增殖抑制作用；
利用流式细胞术检测线粒体膜跨电位及细胞内ATP和ROS水平变化；分光光度法检测线粒体呼吸链复合物I、II、III和IV的活性；熊果酸30μM作用TC-1细胞6小时后，在透射电镜下检测线粒体形态变化；荧光显微镜下观察线粒体与自噬标志蛋白LC3的位置关系。
结果光镜下可见熊果酸作用24小时，10μM浓度组的细胞形态没有明显改变，而20μM或30μM组的细胞变圆，贴壁松散，分布稀疏，及细胞两极出现黑色小点，出现不同程度的细胞死亡；
MTT实验结果显示熊果酸对TC-1癌细胞有显著的增值抑制作用，并呈时间、剂量依赖，尤其是作用3天后，各组抑制率均达90%以上（P＜0．05）；当熊果酸作用24小时，阴性象限荧光占总荧光的比例分别为3.1%、3.8%、6.4%、24.7%，阴性象限比例越大线粒体膜跨电位（Δψm）越低，表明Δψm随着熊果酸作用浓度升高而降低，UA30μM组Δψm降低尤其显著（P＜0．05）；
线粒体呼吸链复合物I、II、III和IV的活性经熊果酸作用24小时均出现明显抑制，尤其是复合酶IV（P＜0．05）；经熊果酸作用24小时，10μM组即出现细胞内ATP水平显著降低；
熊果酸30μM分别作用0、4、8、12、24小时，细胞内ATP水平随作用时间延长逐渐降低，呈时间依赖，并且作用4小时，与对照比ATP水平降低超过50%，12小时后，ATP水平接近0nmol/mg/protein（P＜0．05）；细胞内ROS的水平也随熊果酸作用浓度升高而显著降低，熊果酸作用24小时细胞内ROS阳性率分别是86.46%、82.52%、69.35%、57.24%（P＜0．05）。
参考文献
[1]Ursolic acid promotes cancer cell death by inducing Atg5‐dependent autophagy[J].Shuilong Leng,Yanli Hao,Daobing Du,Shanyan Xie,Lepeng Hong,Haigang Gu,Xiao Zhu,Jinfang Zhang,Daping Fan,Hsiang‐fu Kung.Int.J.Cancer.2013(12)
[2]Molecular signaling toward mitophagy and its physiological significance[J].Du Feng,Lei Liu,Yushan Zhu,Quan Chen.Experimental Cell Research.2013(12)
[3]From tumor cell metabolism to tumor immune escape[J].Martin Villalba,Moeez G.Rathore,Nuria Lopez-Royuela,Ewelina Krzywinska,Johan Garaude,Nerea Allende-Vega.International Journal of Biochemistry and Cell Bi.2013(1)
[4]Mitochondrial dynamics and autophagy aid in removal of persistent mitochondrial DNA damage in Caenorhabditis elegans[J].Amanda S.Bess,Tracey L.Crocker,Ian T.Ryde,Joel N.Meyer.Nucleic Acids Research.2012(16)
[5]谢珊艳.熊果酸诱导TC-1癌细胞自噬性死亡中线粒体相关机制的探讨[D].广州医科大学,2014.