背景[1-3]
小鼠第八因子相关抗原(FVIIIAG)ELISA试剂盒采用双抗体夹心法检测样本中第八因子相关抗原(FVIIIAG)的含量。
实验原理:用抗小鼠FVIIIAg抗体包被于酶标板上,实验时标本或标准品中的FVIIIAg会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠FVIIIAg抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠FVIIIAg抗体与结合在包被抗体上的小鼠FVIIIAg结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入发光底物混合液,发光底物在辣根过氧化物酶的催化下发出荧光,用化学发光免疫分析仪测定化学发光值(RLU),FVIIIAg浓度与化学发光值之间呈正相关,通过绘制标准曲线求出标本中FVIIIAg的浓度。
小鼠第八因子相关抗原(FVIIIAG)ELISA
操作步骤:
1、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品*终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
2、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
3、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
4、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此
重复5次,拍干。
5、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
6、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
10分钟.
7、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
8、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
应用[4][5]
用于小柴胡汤对S180荷瘤小鼠肿瘤血管生成及红细胞免疫的影响研究
探讨小柴胡汤(XCHT)对荷瘤小鼠肿瘤血管生成以及红细胞免疫功能的影响。
方法:复制S180荷瘤小鼠模型,通过定量测定第八因子相关抗原(FⅧ—RA)与血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达来分析XCHT对肿瘤血管生成的影响;通过测定荷瘤小鼠红细胞C3b花环结合率(ERC-C3b)及红细胞免疫复合物IC花环率(ERC-IC)来分析XCHT对红细胞免疫功能的影响。
结果:1、XCHT中(P<0.05),小(P<0.01)剂量组抑瘤率明显;
2、与模型组比较,XCHT小剂量组微血管密度(MVD)明显下降(P<0.05);而对于VEGF三个剂量都有明显抑制作用(P<0.05)。
3、与模型组比较,XCHT中,小剂量组ERC-C3b明显降低(P<0.01),而各剂量组ERC-IC都有升高趋势但以中剂量组升高最明显(P<0.05)。
结论:小柴胡汤对S180荷瘤小鼠肿瘤生长及肿瘤血管生成具有明显抑制作用,但同时也会导致红细胞免疫功能继发性低下。
参考文献
[1]The effects of carvedilol on cardiac structural remodeling:The roleof endogenous nitric oxide in the activity of carvedilol[J].Jiangbin Chen,Congxin Huang,Bin Zhang,Qiao Huang,Jing Chen,Lin Xu.Molecular Medicine Reports.2013(4)
[2]Propranolol for infantile haemangiomas:insights into the molecular mechanisms of action[J].C.H.Storch,P.H.Hoeger.British Journal of Dermatology.2010(2)
[3]Outpatient treatment of periocular infantile hemangiomas with oral propranolol[J].Kathryn M.Haider,David A.Plager,Daniel E.Neely,Jennifer Eikenberry,Anita Haggstrom.Journal of AAPOS.2010(3)
[4]Infantile Hemangioma[J].Kristen E.Holland,Beth A.Drolet.The Pediatric Clinics of North America.2010(5)
[5]刘超.beta肾上腺素受体在婴幼儿血管瘤发病中的作用研究[D].山东大学,2013.