制备[1]
小鼠IgG(immunoglobulin G)蛋白的制备:用纯化的基因工程抗原HIV-p24 免疫雌性 6 周龄BALB/C小鼠,每只小鼠免疫30μg 抗原,在四肢的淋巴结附近皮下多点注射,每间隔30d 免疫1 次,共3 次。第 1次与完全弗氏佐剂混合免疫,后两次与不完全福氏佐剂混合免疫。融合前3d 加强免疫1 次。用小鼠骨髓瘤SP2/0 细胞和免疫小鼠的脾细胞按常规 PEG 方法融合,有限稀释法克隆细胞,间接 ELISA 法筛选特异性抗体,阳性细胞连续克隆4次,直到抗体分泌阳性率达到 100%,确定为稳定的细胞株。间接 ELISA 法检测单抗细胞上清。将抗 HIV-p24 单抗细胞注射小鼠的腹腔,制备腹水。收获的腹水用50%饱和硫酸铵沉淀 1 次,再用30%饱和硫酸铵沉淀两次,沉淀蛋白溶于 pH=7.4 的 PBS 液中,进一步用 DEAE52离子交换纯化,调pH值为7.0,用紫外分光光度计测定抗体蛋白浓度,蛋白贮存液为1mg/mL。
不同小鼠 Ig G对丙型肝炎病毒核心抗原酶联免疫法检测的影响[2]
不同厂家小鼠 Ig G分别配制成不同的抗 HCV-cAg酶结合物溶液,酶标法测定。结果见表 1。虽然每一厂家的标示浓度均>95% ,但由于制备方法、杂质含量、蛋白纯度不同等各种因素的影响,其检测结果不同。不同厂家小鼠 Ig G分别配制成不同的抗 HCV-cAg酶结合物溶液,破坏实验后用酶标法测定结果见表2。由于重金属杂质含量、小鼠 IgG与抗原结合程度不一致等各种因素的影响,其稳定性检测结果会有不同。
主要参考资料
[1]徐宗伟,房丰洲,赵铁强,董申.碳纳米管探针对小鼠IgG蛋白的纳米表征[J].天津大学学报,2009,42(10):919-922.
[2]刘群奇,张桂平,胡道奇.不同小鼠IgG对丙型肝炎病毒核心抗原酶联免疫法检测的影响[J].临床输血与检验,2011,13(04):324-325.