人17-Α-羟化酶(17-Α-OH)ELISA KIT的应用

2022/2/11 10:07:42

背景[1-3]

人17-Α-羟化酶(17-Α-OH)ELISA KIT用于测定血清,血浆及相关液体等样本中人17-Α-羟化酶(17-Α-OH)的含量。

实验原理:人17-α-羟化酶(17-α-OH)ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人17-α-羟化酶(17-α-OH)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人17-α-羟化酶(17-α-OH)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

人17-α-羟化酶(17-α-OH)ELISA试剂盒标本要求

1.血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

2.血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

 

人17-Α-羟化酶(17-Α-OH)ELISA KIT

人17-α-羟化酶(17-α-OH)ELISA试剂盒操作流程

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。

4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用[4][5]

用于Bcl-2,Bax,LHR,17-α羟化酶,eNOS在正常小鼠和亚慢性镉中毒小鼠睾丸的表达研究

探讨Bcl-2和Bax在不同周龄小鼠睾丸的表达;17-α羟化酶、LHR、eNOS在健康,性成熟期小鼠睾丸间质细胞的正常表达定位,以及在亚慢性镉中毒情况下17-α羟化酶、LHR、eNOS三个酶的相应表达变化及其形态学改变。方法:健康雄性ICR小鼠,分别为性成熟前期(4周龄),性成熟期(8周龄),性成熟后(12周龄),通过免疫组化,免疫印迹法研究Bcl-2,Bax在睾丸的表达;性成熟期健康雄性ICR小鼠24只,随机分为4组,每组6只,通过免疫组化、免疫印迹、凋亡检测等方法研究不同浓度镉对小鼠睾丸间质细胞17-α羟化酶、LHR、eNOS的表达影响及病理形态学改变等。

结果:首先,对于不同周龄健康小鼠,Bcl-2和Bax均参与间质细胞的发育,Bcl-2在睾丸间质细胞高表达,Bax在生精上皮有表达;8周龄小鼠睾丸间质细胞Bcl-2表达明显高于4、12周龄组,且8周龄组小鼠Bax表达明显低于4、12周龄组小鼠(P<0.05);4周龄组小鼠睾丸eNOS蛋白表达明显高于8、12周龄组(P<0.01);其次,对于镉中毒实验,可见,随着小鼠中毒浓度加深,睾丸损伤程度表现越来越严重,免疫组化显示在低、中浓度中毒之前LHR、17-α羟化酶及eNOS均表达渐增强,致最高中毒浓度时,表达降低。结论:Bcl-2、Bax与LHR、17-α羟化酶,eNOS均在间质细胞起着重要的作用,Bcl-2、Bax参与生精细胞的正常凋亡调控,而这种调控机制与eNOS未见明显的直接关联;镉对睾丸有损伤,其损伤机制可能是机体通过性腺轴调控LHR、17-α羟化酶及NO的合成以完成代偿机制,彼此存在某种关联以维持小鼠在有损伤情况下的生长发育,也说明NO参与了机体的损伤修复机制。

参考文献

[1]Seminal BAX and Bcl2 gene and protein expression in infertile men with varicocele[J].Taymour Mostafa,Laila Rashed,Nashaat Nabil,Rania Amin.Urology.2014

[2]Rapamycin inhibits acrolein‐induced apoptosis by alleviating ROS‐driven mitochondrial dysfunction in male germ cells[J].X.He,W.Song,C.Liu,S.Chen,J.Hua.Cell Prolif..2014(2)

[3]New insights into germ cell migration and survival/apoptosis in spermatogenesis[J].Hao Chen,Kin Lam Fok,Xiaohua Jiang,Hsiao Chang Chan.Spermatogenesis.2012(4)

[4]Role of Bcl‐2 in tumour cell survival and implications for pharmacotherapy[J].Mary Tomek,Toru Akiyama,Crispin R.Dass.Journal of Pharmacy and Pharmacology.2012(12)

[5]左俐俊.Bcl-2,Bax,LHR,17-α羟化酶,eNOS在正常小鼠和亚慢性镉中毒小鼠睾丸的表达[D].桂林医学院,2016.

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