背景[1-3]
大鼠脂多糖结合蛋白(LBP)ELISA试剂盒用于体外定量检测Rat血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组LBP浓度。
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗大鼠LBP抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的大鼠LBP会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗大鼠LBP抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗大鼠LBP抗体与结合在包被抗体上的大鼠LBP结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，LBP浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中LBP的浓度。
大鼠脂多糖结合蛋白(LBP)ELISA试剂盒
脂多糖（LPS）结合蛋白（LBP）是存在于正常人中和动物血清中的一种糖蛋白，分子量为60kDa，其蛋白质部分为456个氨基酸残基组成的肽链，由肝细胞合成.LBP与LPS中的脂质A具有高度亲和性，可作为LPS载体，催化LPS与CD14结合；LBP还可作为调理素，促进单核细胞等吞筮调理后的LPS和革兰阴性菌.LPS与急性期蛋白脂多糖结合蛋白（lipopolysaccharide binding protein，LBP）结合，可导致炎症反应失控及免疫防御屏障机能下降，引起全身炎性反应综合征、脓毒性休克、急性肺损伤甚至多器官功能障碍综合征.另有研究表明LBP亦有抗炎作用，LBP发挥不同的作用是由不同的功能位点决定的.因此说LBP在炎症反应中有双韧剑的作用。
实验步骤：
1.从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3.待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；
4.随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于脂多糖结合蛋白对内毒素性肺损伤的调节作用及机理研究
LBP还可促进LPS与高密度脂蛋白或巨噬细胞膜上清除受体（scavenger receptor,SR）的结合而加速LPS的清除，从而减轻LPS的毒性作用。目前就LBP对LPS不同调节作用的机制仍不清楚。
围绕LBP对LPS的调节作用，从以下三个方面进行了研究：
，经50％饱和硫酸铵溶液盐析、Bio-Rex70阳离子交换层析和MonoQ阴离子交换层析，从大鼠急性反应期血清中分离、纯化LBP，为进一步研究LBP对LPS的调节机制奠定基础。
第二，采用RT-PCR和Western-blotting，观察LPS在诱导肺泡巨噬细胞中TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA表达及p38MAPK蛋白激酶活化的过程中，LBP对LPS调节作用的时间和剂量依赖性，从细胞内信号传导和基因转录水平探讨LBP对LPS的调节机制。
第三，用油酸和LPS复制一次打击和二次打击的大鼠急性肺损伤模型，观察LBPmRNA的动态变化及山度若碱的保护作用，探讨LBP在体内对LPS的增敏效应及山莫蓉碱的保护机制。
研究结果显示：①从300ml大鼠急性反应期血清中分离、纯化到762 u g大鼠LBP，纯化倍数达1570倍。纯化的大鼠LBP在SDS－PAGE的60kD处呈单一条带，并可明显增强FITC毛PS与外周血单个核细胞（PBMC）的结合。
②当LPS为0刀ling几，LBR为ling／L以下时，各细胞因子mRNA的表达随LBP浓度的增加而增高，而10mg／L LBP对各细胞因子mRNA表达的上调作用反而有所减弱；当LPS浓度为ling几时，不同浓度的LBP对LPS诱导肺泡巨噬细胞中细胞因子mRNA的表达无影响。
③在各时相点，LBP对0乃ling／L的LPS均有明显的调节作用，而对ling／L的LPS无调节作用。
④LPS刺激15min后，p38MAPK的磷酸化活性开始增高，30min达峰值，60min后下降。LPS浓度为0．cling／L时，LBP对LPS激活P38MAPK信号通路有明显的增强和调节作用；LPS浓度为ling／L时，LBP对LPS激活p38 MAPK无调节作用。
⑤用油酸实施一次打击，可使肺组织中LBP的表达明显增高。在此基础上予小剂量LPS进行二次打击后，肺组织中TNF＊和ILJ 0的表达增高；山度若碱干预可抑制LBP的上调，减少TNF·口和IL刁0的表达，病理改变也明显减轻。
以上结果表明：①用50％饱和硫酸铰沉淀、Bio．Rex70阳离子交换层析和MonoQ预装柱的阴离子交换层析，可从大鼠急性反应期血清中纯化到具有生物学活性的LBP。②LBP对LPS的调节作用具有明显的剂量依赖性，无时间依赖性。
参考文献
[1]Toll-like receptors in inflammation,infection and cancer[J].Keqiang Chen,Jian Huang,Wanghua Gong,Pablo Iribarren,Nancy M.Dunlop,Ji Ming Wang.International Immunopharmacology.2007(10)
[2]Acute lung injury and the acute respiratory distress syndrome:a clinical review[J].Arthur P Wheeler,Gordon R Bernard.The Lancet.2007(9572)
[3]Acute lung injury/acute respiratory distress syndrome（ALI/ARDS）:the mechanism,present strategies and future perspectives of therapies[J].Shi-ping Luh,Chi-huei Chiang.Journal of Zhejiang University SCIENCE B.2007(1)
[4]Pathophysiology of Acute Lung Injury and the Acute Respiratory Distress Syndrome[J].Lorraine Ware.Semin Respir Crit Care Med.2006(04)
[5]侯一峰.脂多糖结合蛋白对内毒素性肺损伤的调节作用及机理研究[D].第三军医大学,2001.