背景[1-3]
选择性凋亡DNA LADDER抽提试剂盒选择性从组织和细胞中分离提取凋亡DNA ladder，通过选择性分离基因组DNA与凋亡DNA ladder，限度的减少了基因组DNA对凋亡DNA ladder的观察干扰，因此显著提高了检测敏感度。反应可在微量离心管进行，2.5小时完成，快速方便；无需有机抽提，检测灵敏度J高，可从约2000个凋亡细胞中检测到DNA ladder。推荐起始细胞量为5-10x105个，但投入的细胞量可在1x105~5 x106之间变化。
原则是总细胞中应含有至少约1-2x104个凋亡细胞。多于2x104个凋亡细胞通常可获得十分清晰的凋亡DNA ladder。本试剂盒也可用于从组织中提取凋亡DNA ladder。但与培养细胞相比，整体动物组织凋亡细胞出现的时间、部位、程度等规律性差往往造成难以准确取材，可能显著影响实验结果。
凋亡(apoptosis)或程序性死亡的细胞一个形态学的显著特点是染色体DNA以核小体为单位（185bp）规律断裂形成长度约为n x 185bp(n=1,2,3,4...）的DNA片段，经琼脂糖凝胶电泳显示为阶梯状凋亡DNA Ladder，是凋亡细胞最直观的特征。
选择性凋亡DNA LADDER抽提试剂盒
细胞凋亡(Apoptosis)是生物体发育等生命过程中普遍存在的、由基因决定的细胞主动有序的死亡方式。当细胞遇到内、外环境因子刺激时，启动基因调控的自杀保护措施，去除体内非必需细胞或即将发生特化的细胞。在这一过程中，细胞脱落离体或裂解为若干凋亡小体，并迅速被巨噬细胞或邻近细胞清除，这是一种由基因控制、高度有序的细胞自主死亡，包含一系列信号事件组成的通路。
细胞凋亡失调与多种疾病有关，例如阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease)和癌症等。
细胞凋亡通过特征性的形态学和生物化学变化而区别于坏死(Necrosis)，包括细胞皱缩、细胞核皱缩、核膜核仁破碎等等。在正常活细胞中，磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine，简称PS)位于细胞膜的近细胞质面。而在凋亡细胞中，PS从质膜的内部外翻到细胞表面即细胞膜外侧，从而使PS暴露于细胞外部。在白细胞的凋亡过程中，白细胞表面的PS标记可以被巨噬细胞识别，从而最终被巨噬细胞吞噬。
应用[4][5]
用于Rbm14在小鼠早期胚胎发育过程中的功能研究
选择性剪接是由反式作用RNA结合蛋白结合到mRNA前体转录本的顺式作用元件上调控的。剪接小体作为介导mRNA前体剪接的核心反式作用元件,由5个小核RNAs和多种RNA结合蛋白因子组成的。除了剪接小体,其他辅助性RNA结合蛋白,尤其是RNA识别基序（RNA Recognition Motif,RRM）,也参与了时空特异性选择性剪接事件的调控。RBM14是一种RNA结合蛋白,参与多种细胞功能和生物过程,比如转录共激活、纺锤体组装、病毒感染和干细胞分化等。
最近研究也报道了RBM14在小鼠胚胎干细胞（mouse Embryonic Stem Cells,mESCs）的多能性维持和中胚层分化中发挥重要作用。然而,RBM14在哺乳动物胚胎发育中的体内功能还不清楚。在成簇规律间隔的短回文重复序列（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR/Cas9）和胚胎显微注射技术的介导下,我们得到了Rbm14单等位基因敲除小鼠,并将其雌雄小鼠进行交配。结果发现,Rbm14双等位基因敲除会导致小鼠胚胎致死。
进一步的组织学分析表明,Rbm14敲除会导致上胚层细胞凋亡和mESCs细胞凋亡,以致小鼠胚胎发育阻滞在原肠胚阶段。机制研究发现,RBM14参与DNA损伤应答相关基因的选择性剪接,敲除RBM14会导致这些基因发生异常的选择性剪接,并造成mESCs中DNA损伤的积累。因此,研究发现,在小鼠早期胚胎发育过程中,RBM14通过调控与DDR相关基因的选择性剪接,在维持基因组DNA完整性中发挥了关键性作用。
研究中的关键新发现包括:（1）Rbm14双等位基因敲除,造成小鼠早期胚胎致死。（2）Rbm14双等位基因敲除后,引起着床后胚胎上胚层细胞周期阻滞和细胞凋亡,导致早期胚胎发育中原肠运动紊乱。（3）Rbm14敲除,导致在mESCs中DNA损伤的积累。（4）RBM14与可变剪接因子相互作用,通过选择性剪接调控DDR相关基因。
参考文献
[1]RBM14 is indispensable for pluripotency maintenance and mesoderm development of mouse embryonic stem cells[J].Guilai Chen,Da Zhang,Linlin Zhang,Guihai Feng,Boya Zhang,Yihui Wu,Wei Li,Ying Zhang,Baoyang Hu.Biochemical and Biophysical Research Communicatio.2018(1)
[2]The RNA-binding landscape of RBM10 and its role in alternative splicing regulation in models of mouse early development[J].Julie Rodor,David R.FitzPatrick,Eduardo Eyras,Javier F.Cáceres.RNA Biology.2017(1)
[3]Maternal BCAS2 protects genomic integrity in mouse early embryonic development[J].Xu Qianhua,Wang Fengchao,Xiang Yunlong,Zhang Xiaoxin,Zhao Zhen-Ao,Gao Zheng,Liu Wenbo,Lu Xukun,Liu Yusheng,Yu Xing-Jiang,Wang Haibin,Huang Jun,Yi Zhaohong,Gao Shaorong,Li Lei.Development.2015(22)
[4]A Liquid-to-Solid Phase Transition of the ALS Protein FUS Accelerated by Disease Mutation[J].Avinash Patel,Hyun O.Lee,Louise Jawerth,Shovamayee Maharana,Marcus Jahnel,Marco Y.Hein,Stoyno Stoynov,Julia Mahamid,Shambaditya Saha,Titus M.Franzmann,Andrej Pozniakovski,Ina Poser,Nicola Maghelli,Loic A.Royer,Martin Weigert,Eugene W.Myers,Stephan Grill,David Drechsel,Anthony A.Hyman,Simon Alberti.Cell.2015(5)
[5]李静.Rbm14在小鼠早期胚胎发育过程中的功能研究[D].中国科学技术大学,2019.