背景[1-3]
丙二醛(MDA)测定试剂盒(TBA法)可以定量检测血清、血浆、组织、细胞等样品中的丙二醛(MDA)含量。
实验原理：
丙二醛（MDA）是常用的膜脂过氧化指标，在酸性和高温度条件下，可以与硫代巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的三甲川（3，5，5-三甲基恶唑-2，4-二酮），其吸收波长在532nm。但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中*主要的是可溶性糖，糖与TBA显色反应产物的吸收波长在450nm，但532nm处也有吸收。植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中MDA—TBA反应物质含量时一定要排除可溶性糖的干扰。低浓度的铁离子能够显著增加TBA与蔗糖或MDA显色反应物在532、450nm处的消光度值，所以在蔗糖、MDA与TBA显色反应中需一定量的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为每克千重100—300ug/g，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe3+的终浓度为0.5umol/L。
丙二醛(MDA)测定试剂盒(TBA法)
操作流程
1：MDA的提取称取剪碎的试材1g，加入2mll0%TCA和少量石英砂，研磨至匀浆，再加8mlTCA研磨，匀浆在4000r/min离心10min，上清液为样品提取液。
2：显色反应和测定吸取离心的上清液2ml（对照加2ml蒸馏水），加入2ml0.6%TBA溶液，混匀物于沸水浴上反应15min，迅速冷却后再离心。取上清液测定532、600和450nm波长下的消光度。
机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物。如：醛基（丙二醛MDA）、酮基、羟基、羰基、氢过氧基或内过氧基，以及新的氧自由基等。脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成活性化学剂，即非自由基性的脂类分解产物，而且通过链式或链式支链反应，放大活性氧的作用。
因此，初始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成，这些分解产物中，一些是无害的，另一些则能引起细胞代谢及功能障碍，甚至死亡。氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸的过氧化引起细胞损伤，而且还能通过脂氢过氧化物的分解产物引起细胞损伤。因而测试MDA的量常常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的程度。MDA的测定常常与SOD的测定相互配合，SOD活力的高低间接反应了机体清除氧自由基的能力，而MDA的高低又间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度，通过SOD与MDA的结果分析有助于医学、生物学、药理及工农业生产的发展。
应用[4][5]
用于慢性牙周炎血清超氧化物歧化酶和丙二醛水平与2型糖尿病相关性的研究
实验通过检测和比较慢性牙周炎（chronic periodontitis,CP）与2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）患者血清丙二醛（malondialdehyde,MDA）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）水平,以期探讨慢性牙周炎与2型糖尿病的相关性。
方法:本实验采用病例对照研究,选取慢性牙周炎患者20例（牙周炎组）,2型糖尿病患者23例（糖尿病组）,慢性牙周炎合并2型糖尿病患者24例（牙周炎合并糖尿病组）,健康对照者21例（健康组）。检测并比较各组牙周袋深度（probing depth,PD）,附着丧失（attachment level,AL）、探诊出血（bleeding on probing,BOP）、糖化血红蛋白（HbA1c）、空腹血糖（FPG）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TCH）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、丙二醛和超氧化物歧化酶水平。所得数据计量资料以均数±标准差表示,多组间比较采用单因素方差分析,若有差异,进一步采用LSD检验;计数资料的比较使用卡方检验。
结果:1、各组牙周临床指标:牙周炎组、牙周炎合并糖尿病组分别与糖尿病组、健康组相比,各牙周临床指标明显偏高;而牙周炎组与牙周炎合并糖尿病组之间牙周临床指标无统计学差异。
2、生化指标的比较:（1）各组甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白水平无统计学差异。（2）牙周炎组糖化血红蛋白、空腹血糖、高密度脂蛋白水平与健康组无统计学差异。（3）糖尿病组和牙周炎合并糖尿病组的糖化血红蛋白、空腹血糖水平高于牙周炎组和健康组,有统计学差异;糖尿病组和牙周炎合并糖尿病组高密度脂蛋白低于健康组,有统计学差异;糖尿病组与牙周炎合并糖尿病组之间糖化血红蛋白、空腹血糖、高密度脂蛋白水平无统计学差异。
3、各组丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平的比较:糖尿病组、牙周炎合并糖尿病组血清MDA和SOD水平明显高于牙周炎组、健康组,差异有统计学意义,其中糖尿病组MDA和SOD水平最高,健康组MDA水平最低,牙周炎组SOD水平最低。
4、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）与其他临床指标之间直线相关性分析:丙二醛与超氧化物歧化酶、糖化血红蛋白、空腹血糖、甘油三酯和年龄呈正相关关系,与牙周袋深度和牙周附着丧失无相关关系。超氧化物歧化酶与丙二醛、糖化血红蛋白、空腹血糖和年龄呈正相关关系,与高密度脂蛋白、牙周袋深度和牙周附着丧失呈负相关关系。
结论:1、2型糖尿病患者和慢性牙周炎合并2型糖尿病患者血清MDA、SOD水平较慢性牙周炎患者高。2、在所有受试者中血清MDA水平与SOD、糖化血红蛋白、空腹血糖、甘油三酯和年龄呈正相关关系。3、在所有受试者中血清SOD水平与糖化血红蛋白、空腹血糖和年龄呈正相关,与高密度脂蛋白、牙周袋深度、牙周附着丧失呈负相关关系。
参考文献
[1]Serum levels of antioxidants and superoxide dismutase in periodontitis patients with diabetes type 2[J].Biju Thomas,Amita Rao,Ballamajalu Prasad,Suchetha Kumari.Journal of Indian Society of Periodontology.2014(4)
[2]Comparative evaluation of serum superoxide dismutase and glutathione levels in periodontally diseased patients:An interventional study[J].Thomas Biju,M Shabeer,Ramesh Amitha,B Rajendra,Kumari Suchetha.Indian Journal of Dental Research.2014(5)
[3]Salivary biomarkers:Relationship between oxidative stress and alveolar bone loss in chronic periodontitis[J].Daniela Miricescu,Alexandra Totan,Bogdan Calenic,Brandusa Mocanu,Andreea Didilescu,Maria Mohora,Tudor Spinu,Maria Greabu.Acta Odontologica Scandinavica.2014(1)
[4]Protein carbonyl:An oxidative stress marker in gingival crevicular fluid in healthy,gingivitis,and chronic periodontitis subjects[J].Avani Pradeep,M Ramchandraprasad,Pavan Bajaj,Nishanth Rao,Esha Agarwal.Contemporary Clinical Dentistry.2013(1)
[5]洪宝枝.慢性牙周炎血清超氧化物歧化酶和丙二醛水平与2型糖尿病相关性的研究[D].南昌大学,2015.