背景[1-3]
人前列腺正常细胞是通过一位正常男性前列腺组织切片的周围区域的上皮细胞用单拷贝的人乳头瘤病毒的18(HPV-18)进行转化，建立了RWPE-1细胞株。在三维Matrigel培养时，在雄激素作用下，RWPE-1细胞形成腺胞并向培养基中分泌PSA。当与Matrigel或基质细胞混合注射雄性裸鼠时，RWPE-1细胞也能形成腺胞并产生PSA。来源于RWPE-1细胞再用Kirstin鼠类肿瘤病毒转染Ki-ras基因，建立了能成瘤的RWPE-2细胞株和RWPE2-W99细胞株。另外，用N-甲醇-N-硝基脲(MNU)处理RWPE-1细胞，建立了一系列模拟前列腺癌进程中不同时期的成瘤细胞株。它们是WPE1-NA22、WPE1-NB14、WPE1-NB11和WPE1-NB26细胞株。据提供者报道，RWPE-1细胞经过检测，乙肝、丙肝、人免疫缺陷病毒都呈阴性。
人前列腺正常细胞
培养步骤：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。
应用[4][5]
用于多不饱和脂肪酸影响前列腺细胞生长的生物学行为研究
探讨鱼油对前列腺细胞（PC-3和RWPE-1）的影响,进而选取典型的n-3PUFAs（ALA、EPA、DHA）和n-6PUFAs（LA、GLA、AA）,主要研究其对两细胞的抗氧化系统、吸收金属离子能力、炎症反应的影响及其在两细胞内的代谢转化。
MTT结果表明鱼油对RWPE-1基本没有杀伤力,但对PC-3有一定的杀伤作用；流式细胞术分析发现鱼油作用下PC-3凋亡较RWPE-1严重。SOD、MDA、CAT和GSH-Px结果表明鱼油对两细胞的抗氧化系统均有一定损伤,且RWPE-1内MDA积累量较高。GC分析发现,两细胞内的脂肪酸组成和各类脂肪酸比例都存在显著差异,鱼油作用下PC-3内GLA、AA、EPA和DHA含量的上升均较RWPE-1明显。ELISA检测发现鱼油可使PC-3的LXA4表达量显著上升,而IL-6、TNF-α的表达量却显著下降；RWPE-1的LXA4表达量基本不变,而IL-6和TNF-α表达量却逐渐上升。
构建了PUFAs对两细胞的体外损伤模型,结果表明六种PUFAs均能抑制两细胞的生长,其中LA和ALA对两细胞的损伤较小,GLA和AA对两者则有较大的杀伤力。AA、GLA、EPA和DHA对两细胞的细胞膜通透性和线粒体膜电位的影响均较LA和ALA大,且对PC-3影响更明显。
HPLC分析发现,六种脂肪酸均能抑制PC-3合成ATP,其中AA、GLA、EPA和DHA的抑制效果较LA和ALA好,但对RWPE-1影响较小。研究了PUFAs对两细胞抗氧化系统的影响,结果表明PUFAs作用后RWPE-1内ROS积累较PC-3明显。AA和GLA可使RWPE-1的GSH-Px活性大大下降,EPA和DHA使PC-3的GSH-Px活性显著下降,且PUFAs作用后两细胞内GSH水平上升。PUFAs对两细胞的SOD活性和NO释放量影响较小,但可使MDA含量上升,其中AA、GLA、ALA和DHA对两细胞的MDA积累影响很大。
参考文献
[1]Inhibition of IL-6 expression in LNCaP prostate cancer cells by a combinationof atorvastatin and celecoxib[J].Huaqian Wang,Xiao-Xing Cui,Susan Goodin,Ning Ding,Jeremiah Van Doren,Zhiyun Du,Mou-Tuan Huang,Yue Liu,Xiaodong Cheng,Robert Dipaola,Allan Conney,Xi Zheng.Oncology Reports.2014(2)
[2]Lipid metabolism in cancer[J].Claudio R.Santos,Almut Schulze.FEBS Journal.2012(15)
[3]Acute sensitization of colon cancer cells to inflammatory cytokines by prophase arrest[J].Anton Kuratnik,Virginia E.Senapati,Rajeev Verma,Barbara G.Mellone,Anthony T.Vella,Charles Giardina.Biochemical Pharmacology.2012(9)
[4]Boswellic acid inhibits growth and metastasis of human colorectal cancer in orthotopic mouse model by downregulating inflammatory,proliferative,invasive and angiogenic biomarkers[J].Vivek R.Yadav,SahdeoPrasad,BokyungSung,Juri G.Gelovani,SushovanGuha,SunilKrishnan,Bharat B.Aggarwal.Int.J.Cancer.2012(9)
[5]沈钰珍.多不饱和脂肪酸影响前列腺细胞生长的生物学行为[D].浙江大学,2014.