背景[1-3]
人蛋白酶3抗体(PR3AB)ELISA KIT用于定量或定性检测血清、血浆、组织液的液体样本中的蛋白酶3抗体(PR3AB)。
试剂盒检测原理：本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被蛋白酶3抗体(PR3AB)多克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中蛋白酶3抗体(PR3AB)浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中蛋白酶3抗体(PR3AB)含量。
人蛋白酶3抗体(PR3AB)ELISA KIT
检测程序
1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。
3.每孔中加入抗体工作液10 0ul。将反应板充分混匀后置37℃6 0分钟。
4.洗板：同前。
5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃3 0分钟。
6.洗板：同前。
7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。
8.每孔加入100ul终止液混匀。
9.30分钟内用酶标仪在45 0 nm处测吸光值。
结果计算与判断
1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。
2.以标准品20 00、100 0、500、250、125、62.5、31.2、0 ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。
3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应蛋白酶3抗体(PR3AB)含量即可。
应用[4][5]
用于狼疮性肾炎合并抗中性粒细胞胞浆抗体阳性患者临床病理及预后的相关性研究
探讨中国人群中ANCA与LN的组织病理学特征,血清SLE活动性和肾脏结局之间的关系显得尤为重要。目的探讨狼疮性肾炎患者合并抗中性粒细胞胞浆抗体阳性其临床病理及预后的特征;分析狼疮性肾炎患者死亡或行肾脏替代治疗的影响因素。
方法：回顾性分析共纳入283例肾穿刺诊断为狼疮性肾炎患者。ANCA阳性有36例患者,并将该组与其余247例ANCA阴性的患者的临床病理结果进行比较。采用Cox回归分析狼疮性肾炎患者死亡或肾脏替代治疗的影响因素。
结果（1）在回顾性研究中共招募283例患者,其中ANCA阳性组36例,ANCA阴性组247例。ANCA阳性组大多数患者具有抗髓过氧化物酶（MPO）抗体（82%）,11%具有抗蛋白酶3（PR3）抗体,同时具有抗MPO和抗PR3抗体的患者占7%。
（2）通过流式免疫荧光法检测,ANCA阳性组患者活检时的抗MPO和抗PR3抗体滴度明显高于ANCA阴性组患者（P＜0.001,P=0.033）。通过ELISA方法检测,ANCA阳性组和ANCA阴性组之间的抗MPO抗体和抗PR3抗体滴度差异无统计学意义。
（3）ANCA阳性组与ANCA阴性组相比,肾活检时的年龄差异无统计学意义（P=0.749）。ANCA阳性组的男:女比例显著高于ANCA阴性组（1:4.6比1:35,P=0.021）。
（4）在增生性狼疮性肾炎中,ANCA阳性组节段性毛细血管内细胞增生更为常见（P=0.011）;肾小球硬化的百分比在ANCA阳性组明显低于ANCA阴性组（P=0.046）;新月体类型在两组之间差异具有统计学意义（P＜0.001）,其中ANCA阳性组细胞纤维性新月体比例明显高于ANCA阴性组（P＜0.001）,而Ⅳ-S期的细胞纤维性新月体比例明显低于其他分期（P=0.016）。
（5）与ANCA阴性组的LN患者相比,ANCA阳性组的LN患者表现出更高的抗dsDNA抗体滴度和血清肌酐水平（P＜0.001,P=0.050）,以及更低的血清血红蛋白浓度（P=0.033）;两组蛋白尿水平差异无统计学意义。
（6）在治疗方法选择上两组无显著差异,但两组对治疗的反应有统计学差异（P=0.012）。ANCA阴性组的患者缓解率明显高于ANCA阳性组（缓解率分别为74.9%对69.4%,P＜0.001）。
（7）Kaplan—Meier生存分析结果表明,两组患者肾脏累积存活率差异具有统计学意义（卡方检验,P=0.041）。多变量Cox回归分析显示,神经系统疾病,ANCA阳性和慢性化积分（CI）是患者肾脏存活的独立危险因素。
（8）肺部感染是LN患者主要的死亡原因,并且通常是由于真菌感染引起的;ANCA阳性组肺部感染导致的死亡率显著高于ANCA阴性组（P=0.013）;主要是MPO相关的狼疮性肾炎;病理类型主要是增生性狼疮,尤其是Ⅳ-G型。
参考文献
[1]ANCA-Associated Necrotizing Glomerulonephritis Overlapping with Mesangial Proliferative Lupus Nephritis Refractory to Plasmapheresis,Steroid Pulse Therapy,and a Combination of Mycophenolate Mofetil and Rituximab[J].Saika Sharmeen,Clarissa Cassol,Hiroshi Kato,Tsai-Ching Hsu.Case Reports in Rheumatology.2018
[2]Mechanisms and disease relevance of neutrophil extracellular trap formation[J].Kristof Van Avondt,Dominik Hartl.European Journal of Clinical Investigation.2018
[3]Anti-Double-Stranded DNA Isotypes and Anti-C1q Antibody Improve the Diagnostic Specificity of Systemic Lupus Erythematosus[J].Yu Jia,Lingling Zhao,Chunyan Wang,Jin Shang,Yi Miao,Yangyang Dong,Zhanzheng Zhao,Mariann Harangi.Disease Markers.2018
[4]Excessive neutrophil extracellular trap formation in ANCA-associated vasculitis is independent of ANCA[J].Tineke Kraaij,Sylvia W.A.Kamerling,Laura S.van Dam,Jaap A.Bakker,Ingeborg M.Bajema,Theresa Page,Francesca Brunini,Charles D.Pusey,Rene E.M.Toes,Hans U.Scherer,Ton J.Rabelink,Cees van Kooten,Y.K.Onno Teng.Kidney International.2018(1)
[5]王帅.狼疮性肾炎合并抗中性粒细胞胞浆抗体阳性患者临床病理及预后的相关性研究[D].郑州大学,2020.