背景[1-3]
凝血因子9抗体是一类可以特异性结合凝血因子9的多克隆抗体，主要用于体外检测凝血因子9的免疫学实验。
凝血因子是参与血液凝固过程的各种蛋白质组分。它的生理作用是，在血管出血时被激活，和血小板粘连在一起并且补塞血管上的漏口。这个过程被称为凝血。整个凝血过程大致上可分为两个阶段，凝血酶原的激活及凝胶状纤维蛋白的形成。它们部分由肝生成。可以为香豆素所抑制。
为统一命名，世界卫生组织按其被发现的先后次序用罗马数字编号，有凝血因子Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ，Ⅶ，Ⅷ，Ⅸ，Ⅹ，Ⅺ，Ⅻ，Xlll等，因子XIII以后被发现的凝血因子，经过多年验证，认为对于凝血功能，无决定性的影响，不再列入凝血因子的编号。因子VI事实上是活化的第五因子，已经取消因子VI的命名。
凝血因子9
血友病是一种出血性疾病。血友病患者出血速度不比常人快,但出血时间会比正常人长。他们的血液中没有足够的凝血因子。凝血因子是血液中一种控制出血的蛋白质。
最常见的血友病叫做血友病A。这是指病人缺乏足够的凝血因子VIII(8)。
另一种不那么常见的叫做血友病B。这种病人缺乏足够的凝血因子IX(9)。
对血友病A和血友病B来说,结果都是一样,也就是病人出血的时间要比正常人长。
应用[4][5]
凝血因子9抗体可以用于重组人凝血因子IX在鸡输卵管中的特异性表达
人凝血因子Ⅸ(human coagulation factorⅨ,hFⅨ)是一种维生素K依赖性的凝血因子,是血液中丝氨酸蛋白酶的前体,在人体的内源性凝血途径中发挥着重要的作用。
性染色体遗传病血友病B就是由于人体血液中缺乏hFⅨ或者hFⅨ的活性不足,导致人体凝血失调引起的,其临床表现为轻微出血或手术出血后无法进行正常凝血,甚至自发性出血,在男性中患病比例为1/30000。包含hFⅨ的人凝血酶原复合物(PCC),是目前国内用于血友病B临床治疗最主要的血液制品,但是受到新鲜血浆来源的限制,PCC常常供不应求。
因此,运用分子生物学技术和生物工程手段,探索建立一套可获得高产量、低成本、质量可靠并可用于临床治疗的重组hFⅨ蛋白的生物反应器系统,不仅能帮助众多血友病B患者,意义重大,而且市场前景广阔,经济效益巨大。本次实验的目的：旨在利用基因表达载体和生物反应器的原理,构建一个可以在鸡输卵管中特异性表达hFⅨ蛋白的重组质粒载体,从而实现hFⅨⅨ基因的在机体内的表达,最终在鸡蛋蛋清中就可以得到hFⅨ蛋白。
实验方法：根据NCBI已公布的hFⅨ的基因序列(GenBank登录号:M11309.1),依据鸡的密码子偏好性,运用生物信息学软件对序列进行密码子优化,获得可在鸡体内表达的重组hFⅨⅨ序列,并送生物公司进行人工合成；利用合成的重组hFⅨ基因片段,结合包含鸡卵清蛋白启动子的质粒,构建鸡输卵管特异性表达载体pL-hFⅨ；将重组质粒载体pL-hFⅨ转入DH5α感受态细胞中扩培并提取质粒后,用基因转染试剂—聚乙烯亚胺(PEI)按一定比例进行包裹,然后通过翅静脉注射处于产蛋高峰期的扬州鸡,收集所产鸡蛋并分离蛋清；用hFⅨ酶联免疫分析试剂盒检测蛋清中hFⅨ蛋白的表达结果。
实验结果显示：在实验组三只产蛋鸡所产鸡蛋蛋清中检测到了hFⅨ蛋白的存在,E6和E8母鸡翅静脉注射重组质粒pL-hFⅨ后,随着时间推移,其鸡蛋蛋清中hFⅨ蛋白浓度呈现线性增加的趋势,hFⅨ的浓度范围在108-144U/L之间,表明利用重组hFⅨ和鸡卵清蛋白启动子质粒构建的重组表达载体pL-hFⅨ取得成功,并且实现了hFⅨ在产蛋鸡输卵管中的暂态表达。
参考文献
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[2]piggyBac transposition into primordial germ cells is an efficient tool for transgenesis in chickens[J].Tae Sub Park;;Jae Yong Han.Proceedings of the National Academy of Sciences,2012(24)
[3]Efficient genetic modification and germ-line transmission of primordial germ cells using piggyBac and Tol2 transposons[J].Joni Macdonald;;Lorna Taylor;;Adrian Sherman;;Koichi Kawakami;;Yoshiko Takahashi;;Helen M.Sang;;Michael J.McGrew.Proceedings of the National Academy of Sciences,2012(23)
[4]Transgenic chickens as bioreactors for protein-based drugs[J].Simon G.Lillico;;Michael J.McGrew;;Adrian Sherman;;Helen M.Sang.Drug Discovery Today,2005(3)
[5]宋政.重组人凝血因子IX在鸡输卵管中的特异性表达[D].扬州大学,2014.