背景[1-3]
总抗氧化能力测定试剂盒可见分光光度法可以测定样本中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
总抗氧化能力测定试剂盒可见分光光度法
总抗氧化能力是指各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成的总抗氧化水平，如抗氧化物酶、维生素C、维生素E和胡萝卜素等，为保护细胞和机体免于活性氧自由基造成的氧化应激损伤。通过检测血浆、唾液、尿液等体液、细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物溶液的总抗氧化能力，对全面科学地评价抗氧化物质的抗氧化能力具有重要意义。
测定原理：
ABTS法是使用最广泛的间接检测方法，可用于亲水性和亲脂性物质抗氧化能力测定。ABTS经氧化后生成稳定的蓝绿色阳离子自由基ABTS+，能溶于水相或酸性乙醇介质中，在734nm处有吸收。被测物质加入ABTS+溶液后，所含抗氧化成分能与ABTS+发生反应而使反应体系褪色。在734nm检测吸光度的变化，并以Trolox作为对照体系量化抗氧化物质的抗氧化能力。
自备实验用品：
恒温水浴锅、低温离心机、分光光度计、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
标本处理：
样品的制备：
(1)血清血浆唾液或尿液样品血浆制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用EDTA抗凝4℃，5000rpm离心10min，取清待测血清唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存不宜超过30 d后再测定
(2)组织样品按照组质g提取液体(mL)为1 5~10的比例建议取约0.1g组，入1mL提取液进行冰浴匀浆，然后12000rpm，4℃离心10min，取清，置冰待测
(3)细胞样品按照胞数104个提取液体mL为500~1000 1的比例建议500万胞入1mL提取液，冰浴超声波破碎率200W，超声3s，间隔10s，重复30次10000rpm，4℃离心10min，取清，置冰待测
应用[4][5]
总抗氧化能力测定试剂盒可见分光光度法可以用于机体总抗氧化能力检测方法的临床应用及总抗氧化能力与GST基因多态性、端粒长度、相关临床指标的关联研究
为了准确评估机体的抗氧化能力,探索氧化应激相关疾病的发病机制,本文基于I2/KI氧化还原电对建立一种能准确、灵敏的测定人体尿液抗氧化能力的方法,并用建立的方法对临床糖尿病患者氧化还原状态进行评价。从精密度、分辨率等角度比较多种检测机体抗氧化力的方法,优选出三种方法用于人体血清总抗氧化力的联合检测,以求达到对人体氧化还原状态的综合评价。
应用建立的联合检测方法对临床慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者和老年人群的总抗氧化力进行测定,同时结合GST基因多态性、端粒长度、相关临床指标来探讨COPD的发病机制,并建立一个判定血清抗氧化力的新指标,即单位白蛋白的抗氧化活性。分析血清和尿液中主要抗氧化物质在总抗氧化力中所占比重及该物质抗氧化机制,以探讨临床疾病的发生与机体抗氧化力之间的关系。
方法:1.基于I2/KI电对浓度比的对数与氧化还原电位(oxidation-reduction potential,ORP)呈线性关系,尿液与已知浓度比的I2/KI电对液反应后,电对液ORP值发生改变,建立了I2/KI电位法测尿液抗氧化能力。等差浓度的维生素C和尿液分别与I2/KI电对液进行反应后测定ORP值,评价方法是否具有良好的线性。根据美国临床实验室标准化委员会(National Committee for Clinical Laboratory Standards,NCCLS)的EP5文件对新建方法的精密度进行评价。并对碘滴定法和I2/KI电位法进行方法学评价。检测30例糖尿病人和30例正常人尿液抗氧化能力来验证此方法的临床应用价值。
2. 通过引入碘液、高锰酸钾溶液、过氧化氢溶液等外源性氧化物质,应用电位法、微量板滴定法、琼脂扩散法等不同检测手段,对血清中的抗氧化物质进行测定。经过对I2/KI电对法,Fe3+/Fe2+电对法,H2O2电位法,碘淀粉微量滴定法,KMnO4微量滴定法,碘淀粉琼脂法,KMnO4琼脂法7种方法的重复性、线性、相对分辨率以及检测条件进行综合比较,从中优化出三种最合适的方法,用于临床糖尿病人和健康人血清总抗氧化能力的检测。
3. 采用普通PCR技术对33例COPD患者和33例健康人的GSTM1、GSTT1基因多态性进行检测,并用实时荧光定量PCR技术测量端粒基因的相对长度,同时采用I2/KI电位法、KMnO4微量滴定法和H2O2电位法三种方法联合检测血清总抗氧化能力,并且对可能与抗氧化能力有关的生化指标进行组间比较。经Logistic回归分析,从中筛选出与COPD发病密切相关的指标做进一步的统计学分析。同理检测老年组和年轻组血清总抗氧化力,验证新建指标的临床应用价值。
4.利用联合检测血清总抗氧化力的方法测定混合血清和等白蛋白浓度的白蛋白标准品抗氧化力,混合血清和等总蛋白浓度的总蛋白标准品抗氧化力,混合尿液和等尿酸浓度的尿酸标准品抗氧化力,混合尿液和等尿素浓度的尿素标准品抗氧化力,混合尿液和等肌酐浓度的肌酐标准品抗氧化力。根据测定结果分别计算白蛋白、总蛋白在血清总抗氧化力中的占比,以及尿酸、尿素、肌酐在尿液总抗氧化力中的占比,并应用质谱方法探讨白蛋白可能的抗氧化机制。
参考文献
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[5]曹廷卉.机体总抗氧化能力检测方法的临床应用及总抗氧化能力与GST基因多态性、端粒长度、相关临床指标的关联[D].大连医科大学,2018.