苯甲基磺酰氟（phenylmethanesulfonylfluoride or phenylmethylsulfonyl fluorid，PMSF）是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂，在生物化学领域，常被用来制备细胞裂解液。
性质
苯甲基磺酰氟难溶于水，且在水溶液中非常不稳定，容易分解。可溶于异丙醇、乙醇、甲醇、二甲苯和石油醚。
苯甲基磺酰氟在水中会迅速降解，所以一般会用无水酒精，异丙醇或者二甲亚砜（DMSO）来制备储备溶液。一般PMSF执行蛋白水解抑制作用的浓度为0.1-1mM。在水溶液中的半衰期短（在pH7下为110分钟，在pH7.5下为55分钟，在pH8下为35分钟，全部在25℃下）。
PMSF会特异性结合到丝氨酸蛋白酶的活性丝氨酸残基，但不会结合到非活性丝氨酸残基。
作用原理
特异性识别并磺化决定酶活性的丝氨酸残基活性位点。此外，其对半胱氨酸蛋白酶（如木瓜蛋白酶，DTT逆转其抑制活性）和哺乳动物来源的乙酰胆碱酯酶也有抑制效果。PMSF常在细胞或组织裂解之前加入到裂解液中以预防蛋白的降解。苯甲基磺酰氟可以单独使用，也常与其他蛋白酶抑制剂如胃抑肽酶A或者磷酸酶抑制剂如正钒酸钠混合使用。
危害
苯甲基磺酰氟严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。