背景[1-3]
人纤维肉瘤细胞来源于一位日本病人的手术切除的肿瘤组织。电镜下可以看到细胞间典型的桥粒和细胞质中大量的张力丝。1975年发现有支原体污染，而后被去除。该细胞整合有HPV16基因组，每个细胞中有1~2个拷贝。
人纤维肉瘤细胞
人纤维肉瘤培养操作
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为类；
1.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4][5]
人纤维肉瘤细胞可以用于左旋棉酚对人纤维肉瘤HT1080细胞凋亡作用及其相关机制研究
通过研究左旋棉酚对人纤维肉瘤HT1080细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的部分相关分子机制。
方法：本实验采用人纤维肉瘤细胞系HT1080细胞离体培养,使用左旋棉酚观察药物对细胞生长的影响。用MTT法检测左旋棉酚对HT1080细胞增殖抑制作用；Hoechst33258、电镜观察左旋棉酚作用后HT1080细胞凋亡的形态学变化；流式细胞仪法检测左旋棉酚作用HT1080后细胞早期凋亡率；比色法测定左旋棉酚作用前后caspase-9、3的活性变化情况；Western blot方法检测左旋棉酚作用HT1080细胞后对Bcl-2、Bax蛋白表达水平的影响。
结果：左旋棉酚对人纤维肉瘤细胞HT1080增殖起抑制作用,且这种抑制作用存在时效和量效关系,即随着左旋棉酚作用时间及浓度的增加,其抑制作用更为明显。左旋棉酚处理组HT1080细胞形态发生变化,Hoechst33258染色出现了经过左旋棉酚处理后,染色质的浓聚高染,经过左旋棉酚处理后的肿瘤细胞电镜下出现了典型细胞凋亡的形态学变化。流式细胞仪法检测到左旋棉酚有诱导HT1080细胞出现早期凋亡的作用。左旋棉酚诱导HT1080细胞凋亡的过程中,先后出现Cacspase-9、Caspase-3的活化。左旋棉酚以浓度依赖方式下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,上调促进肿瘤细胞凋亡的蛋白Bax的表达。
结论：左旋棉酚可以抑制人纤维肉瘤细胞HT1080增殖,促进其发生凋亡。左旋棉酚可能通过对caspase-9、caspase-3的激活,下调细胞中Bcl-2蛋白、上调Bax蛋白的表达起到线粒体途径诱导肿瘤细胞凋亡的作用。
参考文献
[1]Adult-type Fibrosarcoma:A Reevaluation of 163 Putative Cases Diagnosed at a Single Institution Over a 48-year Period[J].Armita Bahrami;;Andrew L.Folpe.The American Journal of Surgical Pathology,2010(10)
[2]Synergistic induction of apoptosis by the Bcl-2 inhibitor ABT-737 and imatinib mesylate in gastrointestinal stromal tumor cells[J].David Reynoso;;Laura K.Nolden;;Dan Yang;;Sarah N.Dumont;;Anthony P.Conley;;Amaury G.P.Dumont;;Kim Zhou;;Anette Duensing;;Jonathan C.Trent.Molecular Oncology,2010(1)
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[4]Synergistic Effects of Sonoporation and Taurolidin/TRAIL on Apoptosis in Human Fibrosarcoma[J].Adrien Daigeler;;Ansgar M.Chromik;;Kathrin Haendschke;;Sabine Emmelmann;;Monica Siepmann;;Karin Hensel;;Georg Schmitz;;Ludger Klein-Hitpass;;Hans U.Steinau;;Marcus Lehnhardt;;Joerg Hauser.Ultrasound in Medicine&Biology,2010(11)
[5]刘朝政.左旋棉酚对人纤维肉瘤HT1080细胞凋亡作用及其相关机制研究[D].新疆医科大学,2011.