兔多克隆抗体制备

2020/1/17 8:12:58

背景[1-6]

兔多克隆抗体制备是用小分子、多肽、修饰多肽、蛋白、融合蛋白、修饰蛋白等作为抗原刺激兔机体,产生免疫学反应,由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组免疫球蛋白,这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。一般而言,抗体按靶位点不同主要分为单克隆抗体和多克隆抗体,由多个B淋巴细胞克隆产生的,受到多种抗原决定簇刺激并可以与多种抗原表位结合的抗体就是多克隆抗体。抗原有两个基本特性,即抗原性和免疫原性。

有抗原性的物质不一定有免疫原性,所以由此引出半抗原和完全全抗原,半抗原必须经过经过一定的改造(偶联蛋白载体BSA,OVA或者HSA等大分子物质)方能成为完全。一般而言完全抗原分子量越大(大于10KDa),结构越复杂引起免疫反应的能力也就越强。抗体就是能与特异性抗原结合的免疫球蛋白,抗体一般分为多克隆抗体和单克隆抗体,多克隆抗体能与抗原的多个表位结合。

兔多克隆抗体制备一般制备流程:①制备抗原;②选择实验动物;③动物免疫;④试取血进行测试,看看是否成功免疫;⑤如果成功免疫,杀死实验动物,采集全部血清;⑥纯化出抗体;⑦鉴定抗体,包括纯度以及特异性。

兔多克隆抗体优势为:

1.制备体系成熟

2.抗兔二抗产品丰富,商业化好,适合检测

3.制备成本相对低廉

应用[7][8]

兔多克隆抗体制备可用于小分子、多肽、修饰多肽、蛋白、融合蛋白、修饰蛋白检测中二级抗体制备。

一种良好的多克隆抗血清含有抗某种抗原不同表位的多种抗体。由于多克隆抗血清通常包含抗某一抗原的不同表位的抗体,包括变性—抗性的表位,所以,在深固定的样本中也会很好地发挥效应,在石蜡包埋组织切片的染色中,多克隆抗体最常选用。根据实验的不同需要,多克隆抗体应用于相应抗原的标记。

此外,在农业生产中,多克隆抗体被用于农药残留现场监测;在临床应用中,多克隆抗体主要用于病原物的检测、疾病的诊断及治疗,如作为蛋白类免疫抑制剂用于移植反应和自身免疫病的治疗。

例如在EB病毒LMP1 C端重组蛋白多克隆抗体的制备和鉴定的实验中制备EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP1)C端(187~386)的原核表达蛋白及其多克隆抗体并检验其生物学特性。

参考文献

[1]Role of the Epstein–Barr virus-encoded latent membrane protein-1,LMP1,in the pathogenesis of nasopharyngeal carcinoma[J].Mhairi A Morris,Christopher W Dawson,Lawrence S Young.Future Oncol..2009(6)

[2]Multiple roles of LMP1 in Epstein-Barr virus induced immune escape[J].J.M.Middeldorp,D.M.Pegtel.Seminars in Cancer Biology.2008(6)

[3]Epstein-barr virus latent membrane protein 1:Structure and functions[J].Hsin-Pai Li,Prof.Yu-Sun Chang.Journal of Biomedical Science.2003(5)

[4]The significance of LMP1 expression in nasopharyngeal carcinoma[J].Sai Wah Tsao,Giorgos Tramoutanis,Christopher W Dawson,Angela K.F Lo,Dolly P Huang.Seminars in Cancer Biology.2002(6)

[5]Epstein–Barr virus in the pathogenesis of NPC[J].Nancy Raab-Traub.Seminars in Cancer Biology.2002(6)

[6]The Epstein-Barr virus transforming protein LMP1 engages signaling proteins for the tumor necrosis factor receptor family[J].George Mosialos,Mark Birkenbacht,Ramana Yalamanchill,Todd Van Arsdale,Carl Ware,Elliott Kleff.Cell.1995(3)

[7]谭凤彪,高家林,陆晓华,章尧.利用合成多肽制备兔多克隆抗体[J].皖南医学院学报,2016,35(05):422-425.

[8]毛珊珊,王路得,周萌,吕开绩,朱进顺,Kamara Saidu,叶晓鲜,张丽芳.EB病毒LMP1 C端重组蛋白多克隆抗体的制备和鉴定[J].温州医科大学学报,2018,48(07):469-473.

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