背景[1-3]
HFT-8810人儿胸腺贴壁细胞系是一种来源于人胎儿胸腺的细胞系,常被用于研究胸腺细胞的发育和分化。这种细胞系具有贴壁生长的特性,并能够支持T细胞的发育和成熟。
HFT-8810人儿胸腺贴壁细胞系在培养中呈现出上皮样形态,并表达多种与胸腺细胞发育相关的基因和表面标志物。这种细胞系可用于研究胸腺细胞的分化、成熟和功能,以及探索与胸腺细胞发育相关的疾病和治疗策略。
HFT-8810人儿胸腺贴壁细胞系
HFT-8810人儿胸腺贴壁细胞系细胞培养方法:
1、HFT-8810人儿胸腺贴壁细胞系细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、HFT-8810人儿胸腺贴壁细胞系细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、HFT-8810人儿胸腺贴壁细胞系细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
应用[4-5]
HFT-8810人儿胸腺贴壁细胞系可以用于CD34~+细胞体外诱导分化为T细胞的实验研究
利用脐带血分离出造血干/祖细胞,研究其在体外定向诱导分化为T淋巴细胞,从而证明造血干/祖细胞具有向T淋巴细胞分化的能力。并为研究T细胞生物学特性及细胞免疫提供技术平台。
应用MACS方法分离人脐带血CD34+细胞接种到人胎儿胸腺基质单层细胞上,IMDM液体培养基含20%人AB血清并加入FL、IL~12、IL-7和IL-2细胞因子组合,于培养7、14、21、28、35、42天取非贴壁细胞用PBS洗两遍,利用流式细胞仪对细胞免疫表型进行检测。培养4周后的T淋巴细胞进行PHA、IL-2非特异性抗原刺激,瑞士染色观察细胞形态。培养5周后的T淋巴细胞进行肿瘤细胞杀伤实验。
结果:2周后,CD4+CD8+非成熟T淋巴细胞占细胞总数的0.3%~13.3%,4~5周CD4+CD8+T淋巴细胞达到高峰占16.6%~26.5%,且CD3+CD4+CD8-和CD3+CD4-CD8+T淋巴细胞逐渐增多,6周后达26.5%~64.9%和11.6%~38.9%。培养成熟的T淋巴细胞经PHA+IL-2刺激后细胞数量增多至3~5倍,瑞氏染色鉴定可见大原始淋巴细胞存在,T细胞转化为淋巴母细胞,细胞内可见核仁,部分细胞出现有丝分裂现象。培养成熟的T淋巴细胞杀伤肿瘤细胞K562杀伤率570nm和490nm的光密度(OD)分别为19.44%和10%。
因此,利用人脐血CD34+细胞体外接种到HFT-8810人儿胸腺贴壁细胞系基质单层细胞上加FL、IL-12、IL-7和IL-2细胞因子组合条件下,可诱导分化出T淋巴细胞,并且培养的T细胞对有丝分裂素刺激有增殖反应以及具有杀伤肿瘤细胞的效应。从而为T细胞的基础免疫学研究及临床治疗需要提供了研究及应用素材。这项研究也证明了脐带血可以作为多潜能造血干/祖细胞的替代源,具有向T淋巴细胞分化的能力,对扩大基因治疗和移植研究范围具有深远意义。
参考文献
[1]Human CD34+HLA-R-bone marrow cells contain progenitor cells capable of self-renewal,multilineage differentiation,and long-term in vitro hematopoiesis.Srour EF,Brandt JE,Briddell RA,et al.Blood cells.1991
[2]The thymus gland.Askin DF,Young S.Neonatal Netw.2001
[3]Mesenchymal stem cells suppress allogeneic T cell responses by secretion of TGF-betal.Chen JL;Guo ZK;Xu C,et al.Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi.2002
[4]The human thymus during aging.Barton F.Haynes;Gregory D.Sempowski;Alvin F.Wells;Laura P.Hale.Immunologic Research,2000
[5]姚志娟.CD34~+细胞体外诱导分化为T细胞的实验研究[D].中国人民解放军军事医学科学院,2004.