背景[1-3]
NCI-H2452人间皮瘤贴壁细胞系是一种来源于人类皮肤鳞状细胞癌的细胞系。它最初是由美国国立癌症研究所(NCI)于1970年代从一名患有皮肤鳞状细胞癌的患者体内分离出来的。
NCI-H2452人间皮瘤贴壁细胞系
NCI-H2452细胞系的特点包括：
贴壁生长：NCI-H2452细胞系可以在含有血清的培养基中贴壁生长，形成单层或多层的细胞群落。
异质性：NCI-H2452细胞系具有较高的异质性，即不同克隆的细胞在形态、生长速度和基因表达等方面存在差异。
耐药性：NCI-H2452细胞系对多种化疗药物具有耐药性，这使得它成为研究皮肤鳞状细胞癌耐药机制的重要工具。
基因突变：NCI-H2452细胞系中存在多个已知的致癌基因突变，如TP53、EGFR等。这些突变可能与该细胞系的恶性转化有关。
NCI-H2452人间皮瘤贴壁细胞培养操作
1)复苏NCI-H2452人间皮瘤贴壁细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)NCI-H2452人间皮瘤贴壁细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)NCI-H2452人间皮瘤贴壁细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4-5]
NCI-H2452人间皮瘤贴壁细胞可以用于LncRNA MALAT1促进恶性胸膜间皮瘤细胞增殖侵袭的机制研究及靶向治疗影像学评价
恶性胸膜间皮瘤(Malignant pleural mesothelioma,MPM)是一种源自胸膜表面具有高度侵袭性的罕见恶性肿瘤,近年来发病率和死亡率持续性增长。该病预后差,中位生存期仅为8-14个月,预后不良的主要原因是缺乏有效的治疗方案。LncRNA MALAT1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1)是lncRNA家族重要成员,作为癌基因在很多肿瘤的发生发展中发挥着重要作用,但是LncRNAMALAT1在MPM发生发展中的生物学功能和调控机制尚无研究。本研究将探讨LncRNA MALAT1在MPM细胞中的分子生物学功能和具体调控机制,为MPM的靶向治疗提供新的靶点和治疗思路。同时,通过靶向MALAT1治疗后荷瘤动物模型的多模态影像学定量分析,为将来靶向MALAT1治疗MPM的疗效评价和随访提供参考。
[方法]LncRNAMALAT1促进恶性胸膜间皮瘤细胞增殖侵袭机制的实验研究及靶向治疗影像学评价首先,采用慢病毒转染特异性敲低MPM细胞的MALAT1表达水平并制备稳转细胞株。通过CCK8、克隆形成、EdU实验以及细胞凋亡和细胞周期检测敲低MALAT1对于MPM细胞增殖能力的影响,划痕愈合实验和Transwell实验检测对迁移和侵袭能力的影响。然后,建立裸鼠移植瘤模型,体内验证MALAT1对MPM细胞增殖能力的影响。最后,对两组荷瘤动物模型进行MRI(常规扫描+多b值DWI扫描)、18F-FDGPET/CT及Micro-CT检查,多模态影像学定量评估靶向MALAT1治疗MPM的效果。
[结果]LncRNA MALAT1促进恶性胸膜间皮瘤细胞增殖侵袭机制的实验研究及靶向治疗影像学评价RT-qPCR结果显示,三种人MPM细胞(NCI-H226、NCI-H2452人间皮瘤贴壁细胞、MSTO-211H)尤其是上皮型MPM细胞NCI-H226和NCI-H2452人间皮瘤贴壁细胞的MALAT1表达均升高。CCK8、克隆形成、EdU以及细胞凋亡比例和细胞周期结果显示敲低MALAT1抑制了两种MPM细胞的增殖能力,划痕愈合实验和Transwell实验结果显示敲低MALAT1抑制了MPM细胞的迁移和侵袭能力。
移植瘤实验结果显示,敲低MALAT1导致肿瘤生长速度和体积显着降低。MRI常规扫描显示,sh-NC组裸鼠的肿瘤生长迅速,肿瘤体积大,对周围组织有明显压迫现象;与sh-NC组相比较,sh-MALAT1组裸鼠肿瘤生长缓慢,肿瘤体积明显较小,对周围组织的压迫现象不明显。
多b值DWI扫描分析显示,与sh-NC组相比,sh-MALAT1组的ADCslow明显升高,灌注比例f值明显降低。
18F-FDG PET/CT扫描结果显示,sh-NC组肿瘤区域SUVmax与SUVmean为11.3±0.42、10.8±0.16,正常组织区域为6.9±0.33、6.2±0.18,P均<0.05;sh-MALAT1组肿瘤区域SUVmax与SUVmean为14±0.22、13.7±0.12,正常组织区域为12.5±0.27、12.1±0.11,P均>0.05。
相较于sh-NC组,sh-MALAT1组裸鼠肿瘤区域与正常组织区域18F-FDG放射性摄取值差异明显缩小。Micro-CT扫描结果显示,sh-NC组裸鼠移植瘤体积大且密度不均匀,可见局部坏死形成的区域,sh-MALAT1组移植瘤体积小,瘤体密度相对均匀。
参考文献
[1]Artificial intelligence in tumor subregion analysis based on medical imaging:A review..Lin Mingquan;Wynne Jacob F;Zhou Boran;Wang Tonghe;Lei Yang;Curran Walter J;Liu Tian;Yang Xiaofeng.Journal of applied clinical medical physics,2021
[2]RGS12 is a novel tumor suppressor in osteosarcoma that inhibits YAP-TEAD1-Ezrin signaling.Li Yang;Liu Min;Yang Shuting;Fuller Ashley M.;Karin Eisinger Mathason T.S.;Yang Shuying.Oncogene,2021
[3]lncRNA Metastasis-Associated Lung Adenocarcinoma Transcript 1 Promotes Proliferation and Invasion of Non-Small Cell Lung Cancer Cells via Down-Regulating miR-202 Expression..Tiansheng Guo;;Junming Huang;;Xiaoyun Wan;;Peixi Chen;;Shaoshan Du;;Qianping Chen.Cell journal,2020
[4]Aberrant expression of lncRNA MALAT1 modulates radioresistance in colorectal cancer in vitro via miR-101-3p sponging.Jianhong Guo;;Yinhuan Ding;;Hongbo Yang;;Hao Guo;;Xin Zhou;;Xiao Chen.Experimental and Molecular Pathology,2020
[5]王培.LncRNA MALAT1促进恶性胸膜间皮瘤细胞增殖侵袭的机制研究及靶向治疗影像学评价[D].昆明医科大学,2023.