背景[1-3]
TC7人结肠癌细胞系是一种来源于人类结肠癌组织的细胞系。这些细胞在实验室条件下可以进行培养和研究，以深入了解结肠癌的生物学特性、发生机制以及潜在的治疗方法。
TC7人结肠癌细胞系的研究对于理解结肠癌的发病机理、预防和治疗策略的制定具有重要意义。通过对这些细胞的研究，科学家们可以探索结肠癌细胞的生长、增殖、转移和耐药性等特性，以及寻找新的治疗靶点和药物。
在实验室中，TC7人结肠癌细胞系通常通过细胞培养技术进行培养和繁殖。科学家们使用特定的培养基和条件，模拟体内的环境，以促进细胞的生长和增殖。通过这些细胞培养实验，可以观察细胞的形态、生长速度、对药物的敏感性等指标，以评估结肠癌的生物学特性和治疗效果。
TC7人结肠癌细胞系
TC7人结肠癌细胞系细胞培养操作
1)复苏TC7人结肠癌细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)TC7人结肠癌细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)TC7人结肠癌细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4-5]
TC7人结肠癌细胞系可以用于黄连素对人结肠癌细胞凋亡和迁移作用的研究
以人结肠癌细胞系KM12C、KM12SM、TC7人结肠癌细胞系为研究对象,以黄连素为药物处理方式,来探索黄连素对人结肠癌细胞凋亡和迁移作用的影响及其分子机制。在凋亡方面,我们首先采用MTT法测定人结肠癌细胞系KM12C、KM12SM、TC7人结肠癌细胞系的增殖存活率,结果表明黄连素对它们均具有明显的存活抑制作用,且具有剂量依赖关系。其次,我们采用Hoechst33342染色法观测这三种人结肠癌细胞系的形态学变化,用Annexin V/PI双染法检测它们的细胞凋亡率,并用Rhodaminel23染色经流式细胞仪检测三者的线粒体膜电位变化,来探讨经黄连素对人结肠癌细胞的凋亡作用。
结果证实,黄连素可以有效诱导三种人结肠癌细胞系发生凋亡,且同样具有剂量依赖关系。同时,我们还采用Western Blot对TC7人结肠癌细胞系细胞进行蛋白分析,来阐明黄连素诱导人结肠癌细胞凋亡的分子机制。
结果发现,黄连素可以降低Bcl-2、Caspase-3,-9和]PARP的表达,使PARP出现剪切化激活,并提高Bax和AIF的表达,使AIF和Cyt c从线粒体被释放。此外,黄连素还能上调Fas和p53,并下调p65、Ras、p38、Akt和β-catenin等蛋白的表达。最后,我们建立裸鼠模型,研究并证实了黄连素可以在裸鼠体内抑制TC7人结肠癌细胞系细胞的增殖生长。在迁移方面,我们采用细胞划痕实验、免疫荧光技术和蛋白免疫印迹法,证明黄连素可以有效抑制人结肠癌细胞系的迁移作用,并影响Exo70在TC7人结肠癌细胞系细胞内的表达定位,且这种抑制作用可能与下调迁移相关蛋白MMP-2,-9和Exo70有关。
参考文献
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