背景[1-3]
WML2小鼠肺成纤维细胞系是一种常用的实验细胞系，用于研究肺成纤维细胞的生理和病理过程。这种细胞系具有一些独特的特征，使其在科学研究中有广泛的应用。
首先，WML2小鼠肺成纤维细胞系具有高度的相似性，可以模拟肺成纤维细胞在体内的行为和功能。这种相似性使得研究人员可以通过使用这种细胞系来研究肺纤维化等疾病的发生和发展过程。
其次，WML2小鼠肺成纤维细胞系易于培养和操作。这种细胞系可以在实验室条件下进行培养和繁殖，使得研究人员可以方便地获得足够的细胞用于实验。此外，这种细胞系还易于进行基因修饰和药物筛选等实验操作。
此外，WML2小鼠肺成纤维细胞系还可以用于药物筛选和毒理学研究。研究人员可以使用这种细胞系来评估新药对肺成纤维细胞的作用，以及研究化学物质对肺部的毒性影响。这种细胞系的应用有助于加速药物研发和毒理学研究的进程。
WML2小鼠肺成纤维细胞系
WML2小鼠肺成纤维细胞系细胞培养操作
1)复苏WML2小鼠肺成纤维细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)WML2小鼠肺成纤维细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)WML2小鼠肺成纤维细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4-5]
WML2小鼠肺成纤维细胞系可以用于水飞蓟宾与姜黄素共载口服纳米粒的构建及体内外性质评价
以生物表面活性剂槐糖脂(Sophorolipid,SLs)为仿生材料,结合聚合物和磷脂材料,设计口服纳米递药系统,存在克服肠道粘液层屏障,促进细胞摄取,从而提高SLB和CUR的口服生物利用度,增强抑制乳腺癌转移的效果。
方法:首先制备SLB和CUR共载纳米粒(SC-SLPNs),并进行单因素考察,确定较佳处方组成。通过荧光共振能量转移分析、透射电镜观察、X射线衍射分析和差式扫描量热分析,分别对纳米粒形成、形态以及在载体中的存在形式进行表征。考察SLPNs在模拟胃液和模拟肠液中的稳定性,利用透析袋法考察体外释药行为。采用多粒子追踪分析技术评价SLPNs在猪粘液中的扩散能力。通过激光共聚焦显微镜观察SLPNs在小鼠肠道粘液层中的分布情况。以体外Caco-2/HT29-MTX-E12共培养细胞模型考察SLPNs的细胞摄取。通过大鼠口服灌胃给药研究体内药代动力学。通过派伊尔结切片定性分析考察纳米粒的吸收情况。以高转移乳腺癌细胞4T1细胞为模型,考察SC-SLPNs对4T1细胞增殖的抑制作用。以4T1和WML2小鼠肺成纤维细胞系为细胞模型,考察SC-SLPNs抑制乳腺癌细胞迁移的作用。
结果:制备的SLPNs的平均粒径为111.67±3.68 nm,Zeta电位为-12.33±0.42 m V,SLB包封率为96.72±3.58%,载药量为7.16±0.22%;CUR包封率为96.33±5.71%,载药量为3.30±0.36%。SLPNs形态近球形,大小分布较均匀;XRD和DCS结果揭示SLPNs中SLB和CUR以无定形或分子状态存在;SLPNs在模拟胃液和模拟肠液中,24 h内的稳定性较好;对于SC-LPNs体外释放,SLB和CUR 8 h累积释放分别为93.09%和42.15%。多粒子追踪分析结果表明SLs促进纳米粒在粘液层中的穿越。4T1和WML2小鼠肺成纤维细胞系细胞摄取结果表明SLs可促进Caco-2/HT29-MTX-E12对纳米粒的摄取,且细胞表面粘液层对SLPNs摄取阻碍作用较小;入胞动力学结果与细胞摄取一致。细胞水平药效结果表明SLs增强纳米粒对于4T1细胞的毒性作用和抑制4T1细胞迁移作用。
参考文献
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