背景[1-3]
COLO 320DM人结直肠腺癌细胞是一种人结直肠腺癌细胞系，常用于研究结直肠癌的生物学特性和治疗机制。这种细胞系具有产生5-羟色胺、去甲肾上腺素、肾上腺素、ACTH和甲状旁腺素的能力，同时角蛋白和波形蛋白呈弱阳性。
COLO 320DM细胞系的细胞形态为圆形，贴壁生长，可以用于传代培养。细胞系通常在含55%基础培养基、40%胎牛血清和5%二甲基亚砜的培养基中培养，并需要在低氧条件下进行培养。
COLO 320DM细胞系可用于药物筛选和毒性测试等方面，同时也可以用于研究结直肠癌的侵袭和转移机制。此外，该细胞系还可以用于制备组织工程材料和疫苗等生物制品。
需要注意的是，COLO 320DM细胞系是一种肿瘤细胞系，因此在实验操作中需要注意安全问题，避免交叉污染和细胞污染等情况的发生。同时，为了保持细胞的稳定性和生物学特性，需要使用适当的培养基和培养条件进行培养。
COLO 320DM人结直肠腺癌细胞
COLO 320DM人结直肠腺癌细胞培养操作
1)复苏COLO 320DM人结直肠腺癌细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)COLO 320DM人结直肠腺癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)COLO 320DM人结直肠腺癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4][5]
COLO 320DM人结直肠腺癌细胞可以用于乙醇慢性暴露对人结直肠腺癌细胞和正常结肠上皮细胞的细胞毒性和遗传毒性的影响
酒是日常生活中常见的粮食发酵饮料,其主要成分是乙醇（Ethanol）,酒文化渗透于文化艺术/饮食烹饪/养生保健等各方面。但过量乙醇摄入可能与食管癌、结直肠癌等多种消化道肿瘤、以及乳腺癌风险的增加有关。乙醇进入人体后，大部分通过氧化代谢途径被分解为CO2。少量通过非氧化代谢途径被分解代谢。乙醇代谢过程中可产生活性氧(ROS)和乙醛加合物,从而具有遗传毒性。
实验以COLO 320DM人结直肠腺癌细胞和人正常结肠细胞NCM460为材料，探讨乙醇慢性暴露（0.1%、0.2%、0.4%、0.8%和1.6%）36天后的细胞毒性[包括核分裂指数（nuclear divide index,NDI），凋亡（Apoptosis,APO），坏死(Necrosis,NEC)]和染色体不稳定性[Chromosomal instability,CIN，包括微核化双核细胞（Micronucleatedbinucleated cell,MNed BNC），核质桥（nucleoplasmic bridges,NPBs），核芽（nuclearbuds,NBuds）]的影响。
研究结果显示：1、在COLO 320DM人结直肠腺癌细胞中，不同浓度作用下的NDI与对照组无显著差异；各处理组APO均显著高于对照组，且1.6%处理组显著高于0.1%处理组（p<0.01）；各处理组NEC也显著高于对照组，且最低浓度组坏死率显著低于其他高浓度组（p<0.01）。各处理组CIN均显著高于对照组（p<0.01）。
2、在NCM460中，各处理组CIN均显著高于对照组（p<0.01）；0.1—0.8%浓度组NDI与对照组和1.6%有极显著差异（p<0.01）；各处理组APO均高于对照组，且0.8%、1.6%浓度组与对照组有极显著差异（p<0.01）；各处理组的NEC均高于对照组，且除了0.1%处理组以外其他各组均与对照组有极显著差异（p<0.01）。
3、乙醇及其暴露时间对COLO 320DM人结直肠腺癌细胞和NCM460的作用分析显示，这两个因素对NDI、APO、NEC和CIN存在极显著的交互作用（p<0.01）；此外随着乙醇浓度的增加，APO、NEC和CIN的频率逐渐增加，1.6%对APO、NEC和CIN的影响最大。随着乙醇暴露时间的延长，NDI、APO、NEC和CIN的频率没有一定的趋势，但是乙醇暴露时间对细胞损伤和遗传损伤的贡献更大。
4、0.1%—0.4浓度作用时COLO320-DM的NDI均显著高于NCM460（p<0.01）；1.6%浓度作用时，NCM460的APO显著高于COLO 320DM人结直肠腺癌细胞（p<0.01），其余各组没有显著差异；各浓度组NCM460的NEC与COLO 320DM人结直肠腺癌细胞的没有显著差异。此外，各浓度组下NCM460CIN显著低于COLO320-DM（p<0.01）。
结果表明：乙醇慢性暴露可诱发细胞的凋亡和坏死，增加MNed BNC、NBuds、NPBs的频率，导致基因组不稳定；但对细胞增殖无明显影响；慢性乙醇暴露比短期接触大剂量的乙醇对细胞的损伤更大。此外，NCM460的基因组损伤修复能力比COLO 320DM人结直肠腺癌细胞强。
参考文献
[1]General mechanisms of cancer cell metabolic adaptation[J].Christine Perret.Annales d'Endocrinologie,2013(2)
[2]Alcohol,DNA Methylation,and Cancer[J].Varela-Rey,Marta;;Woodhoo,Ashwin;;Martinez-Chantar,Maria-Luz;;Mato,JoséM;;Lu,Shelly C.Alcohol Research,2013(1)
[3]Implications of genetic heterogeneity in cancer[J].Michael W.Schmitt;;Marc J.Prindle;;Lawrence A.Loeb.Annals of the New York Academy of Sciences,2012(1)
[4]Inflammation in Alcoholic Liver Disease[J].H.Joe Wang;;Bin Gao;;Samir Zakhari;;Laura E.Nagy.Annual Review of Nutrition,2012
[5]晓芳.乙醇慢性暴露对人结直肠腺癌细胞和正常结肠上皮细胞的细胞毒性和遗传毒性的影响[D].云南师范大学,2015.