背景[1-3]
MV3人黑色素瘤细胞系是一种来源于人类黑色素瘤的细胞系。黑色素瘤是一种恶性皮肤肿瘤，起源于皮肤中的黑色素细胞。MV3人黑色素瘤细胞系是实验室中常用的研究工具，用于研究黑色素瘤的生物学特性、药物筛选和疫苗开发等领域。
MV3人黑色素瘤细胞系具有以下特点：
高度增殖：MV3人黑色素瘤细胞系在体外培养条件下具有较高的增殖能力，可以快速扩增。
多形性：MV3人黑色素瘤细胞系具有多种形态，包括梭形、多角形和不规则形状等。
高侵袭性：MV3人黑色素瘤细胞系具有较强的侵袭能力，可以在体外模拟黑色素瘤的侵袭过程。
高转移性：MV3人黑色素瘤细胞系具有较高的转移能力，可以在体内模拟黑色素瘤的转移过程。
易于培养：MV3人黑色素瘤细胞系在体外培养条件下生长良好，易于操作和观察。
基因稳定性：MV3人黑色素瘤细胞系具有较好的基因稳定性，可以保持稳定的生物学特性。
适用于多种实验方法：MV3人黑色素瘤细胞系适用于多种实验方法，如免疫荧光染色、流式细胞术、蛋白质组学分析等。
MV3人黑色素瘤细胞系
MV3人黑色素瘤细胞系培养操作
1)复苏MV3人黑色素瘤细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2)MV3人黑色素瘤细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3)MV3人黑色素瘤细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
应用[4][5]
MV3人黑色素瘤细胞系可以用于泛素连接酶Cbl-b对皮肤黑素瘤增殖、凋亡、侵袭能力的影响及其作用机制初步研究
泛素连接酶Cbl-b在皮肤黑素瘤组织和细胞系中的表达及意义目的:探讨泛素连接酶Cbl-b在黑素瘤细胞系A375、M14、MV3人黑色素瘤细胞系和黑素瘤组织中表达情况,并分析其与黑素瘤临床病理特征的相关性。
方法:通过免疫组织化学方法检测Cbl-b蛋白在69例皮肤黑素瘤组织及30例色素痣表达,并分析其与皮肤黑素瘤临床病理特征相关性。QPCR、细胞免疫荧光、Western blot检测Cbl-b在黑素瘤细胞系A375、M14、MV3人黑色素瘤细胞系及黑素细胞中mRNA及蛋白水平。
结果:免疫组化发现Cbl-b在69例皮肤黑素瘤和30例色素痣中分别有52例(75.36%)和4例阳性(13.33%),两组差异有统计学意义(x2=32.745,p<0.01)。Cbl-b表达与皮肤黑素瘤相关预后因素,如肿瘤进展、Clark分级和Breslow厚度呈显著正相关(rs=0.569;rs=0.654;rs=0.727,p值均<0.01)。溃疡组Cbl-b表达显著高于非溃疡组(p<0.01)。QPCR示Cbl-b在黑素细胞及黑素瘤细胞株A375、M14、MV3人黑色素瘤细胞系mRNA表达差异有统计学意义(F=176.537,p<0.01)。细胞免疫荧光、免疫印迹法检测发现皮肤黑素瘤细胞株Cbl-b表达均高于正常黑素细胞,以A375表达水平最高。结论:皮肤黑素瘤和其细胞株均高表达Cbl-b蛋白,说明Cbl-b可能在皮肤黑素瘤发病过程中起正性调控作用。
参考文献
[1]PI3K Pathway Inhibition Achieves Potent Antitumor Activity in Melanoma Brain Metastases In Vitro and In Vivo[J].Heike Niessner;;Jennifer Schmitz;;Ghazaleh Tabatabai;;Andreas M.Schmid;;Carsten Calaminus;;Tobias Sinnberg;;Benjamin Weide;;Thomas K.Eigentler;;Claus Garbe;;Birgit Schittek;;Leticia Quintanilla-Fend;;Benjamin Bender;;Marion Mai;;Christian Praetorius;;Stefan Beissert;;Gabriele Schackert;;Michael H.Muders;;Matthias Meinhardt;;Gustavo B.Baretton;;Reinhard Dummer;;Keith Flaherty;;Bernd J.Pichler;;Dagmar Kulms;;Dana Westphal;;Friedegund Meier.Clinical Cancer Research,2016(23)
[2]Cul1 promotes melanoma cell proliferation by promoting DEPTOR degradationand enhancing cap-dependent translation[J].Lan Chen;;Tianyu Liu;;Yunhua Tu;;Dongyun Rong;;Yu Cao.Oncology Reports,2016(2)
[3]Cbl?b promotes cell detachment via ubiquitination of focal adhesionkinase[J].Yibo Fan;;Xiujuan Qu;;Yanju Ma;;Yunpeng Liu;;Xuejun Hu.Oncology Letters,2016(2)
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[5]王小坡.泛素连接酶Cbl-b对皮肤黑素瘤增殖、凋亡、侵袭能力的影响及其作用机制初步研究[D].北京协和医学院,2017.